普通光学显微镜的使用方法.pptVIP

样品观察 标本：洋葱表皮细胞，观察胞质环流 制作：选新鲜洋葱鳞片叶，在其内侧表皮上用刀片划出长宽都是1cm或更小的方块，然后用镊子剥下叶表皮，放入载玻片上的小水滴中，倾斜盖上盖玻片（注意不要出现气泡）制成水封片。鳞片叶外侧表皮色素较多影响观察，故不宜使用。 自行剪出大小合适的黑色纸片做中央挡光板 可以清楚地看到明亮的细胞壁、半透明的细胞核以及细胞质中小而亮的黑色运动小颗粒。封片中多加一些水，会促进这种运动。 显微镜下看到的洋葱内表皮细胞及示意图 注意事项 在暗视野显微镜实验中，挡光板的中心应放置在显微镜光轴的中心。若中心偏离，则会有部分入射光进入物镜，影响暗视野的效果。进行镜检时，如果视野中样品与背景的反差不强，则可上下调解聚光器，使挡光板的影响与物镜的孔径相当，提高反差 。 荧光显微镜 1.实验原理 荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光，通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像。 荧光显微镜的光路及主要部件： 光源 激发光挡片 激发光滤色镜 分色镜 2.操作步骤 1．打开灯源，超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。??? ?2．透射式荧光显微镜需在灯源与聚光器之间装上所要求的激发滤片，在物镜的后面装上相应的阻断滤片。落射式荧光显微镜需在光路的插槽中插入所要求的激发滤片／双色束分离器／阻断滤片的插块。??? ?3．用低倍镜观察，根据不同型号荧光显微镜的调节装置，调整光源中心，使其位于整个照明光斑的中央。??? ?4．放置标本片，调焦后即可观察。?使用中应注意：末装滤光片不要用眼直接观察，以免引起眼的损伤；用油镜观察标本时，必须用无荧光的特殊油镜；高压汞灯关闭后不能立即重新打开，需经5分钟后才能再启动，否则会不稳定，影响汞灯寿命。 注意事项 激发光挡片的使用——减少淬灭 细胞核与细胞质DNA的直接荧光染色 线粒体GFP转基因拟南芥 观察样品 样品：刚毛藻，在荧光显微镜下看叶绿体 叶绿素在蓝光的激发下发出红光 载玻片洗净重复利用，盖玻片用完扔进垃圾桶 几种显微镜的观察效果对比 思考题 从对不同材料的观察效果中，分析相差显微镜、微分干涉差显微镜和暗视野显微镜各适用于观察什么样的材料？为什么？ 答：不染色的细胞或组织切片缺少细胞内外的反差。本实验介绍的特殊光学显微镜主要是为增强细胞反差而设计的，特别适合活细胞的观察。其中微分干涉差显微镜突出不同密度的细胞组分，适合于酵母、HeLa细胞的细胞核、核仁及一些细胞内颗粒的观察；相差显微镜较好地显示细胞边缘轮廓，适合于酵母、HeLa细胞生长状况的监测；而暗视野显微镜则明显地加强细胞内颗粒的反差，适合于观察细胞运动（洋葱表皮细胞中的“原生质流动”）。 实验一 普通光学显微镜的构造、使用方法及观察 一、实验目的和要求 了解显微镜的构造和各部分的作用，掌握显微镜的使用技术和维护方法 熟练掌握显微镜的合轴调试 制作洋葱鳞叶内表皮细胞临时装片，进行显微镜操作练习。 二、相关知识与实验原理 显微镜的分类 显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和非光学显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。 这两类显微镜又可根据不同的情况分成若干类型 ，如表1-1所示： 显微镜 光学显微镜 非光学显微镜 可见光显微镜 不可见光显微镜 电子显微镜 按照明技术 按像的形成分 按镜体结构分 明视野显微镜 暗视野显微镜 荧光显微镜 相差显微镜 干涉相差显微镜 偏光显微镜 倒置显微镜 实体显微镜 比较显微镜 紫外光显微镜 红外光显微镜 X射线显微镜 透射电子显微镜 扫描电子显微镜 超声波显微镜 基础知识 光学显微镜主要由3部分构成： ①照明系统：包括光源和聚光器。 ②光学放大系统：光学系统由目镜、 物镜等组成。 ③机械装置：用于固定材料和观察方 便，由镜座、镜柱、镜臂、镜筒、 物镜转换器、载物台、推动器、调节器 等部件组成。 尼康E-600显微镜 普通光学显微镜基本构造 显微镜的成像原理 光路：光源→虹彩光圈→聚光镜→通光孔→标本（一定要透明）→物镜→镜筒→目镜→眼。 三、实验器材 显微镜、擦镜纸、镊子、小剪、载玻片、 盖玻片、吸水纸、清水 洋葱、酵母、藻类 四、实验方法和步骤 （一）显微镜的调节 1.取镜和安放 置显微镜于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为3~4cm。镜检者姿势要端正。 （取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。切忌用单手拎提；且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁