实训二细菌性疾病的实验室诊断.pptVIP

实训二 细菌病的实验室诊断 实验内容 病理剖检 细菌分离培养、涂片染色镜检 培养物鉴定 涂片染色镜检 纯化培养、鉴别培养 生化试验 一、目的 掌握×细菌病的实验室诊断方法。 二、器材 动物：病死鸭 器材：搪瓷盘、手术刀、手术剪、镊子、玻片、革兰氏染液、电吹风、酒精棉、酒精灯、接种环、普通琼脂、麦康凯琼脂、鲜血琼脂平板、显微镜、擦镜纸、香柏油、生化培养管 一、病理剖检 记录病理变化 二、细菌分离培养和抹片、染色、镜检 1、细菌分离培养 （1）用火焰灼烧手术刀片，烫肝脏（心脏、脾脏等器官）表面，并迅速划小口 （2）用无菌接种环钩取组织，划线于普通琼脂、麦康凯琼脂，在37℃温箱培养24h观察。 2、抹片、染色、镜检 （1）抹片：用镊子夹取病变组织肝、脾等，然后以灭菌剪刀剪取小块，将其新鲜切面在玻片上压印或抹涂成薄层，自然干燥。将干燥好的抹片，涂抹面向上，以其背面在酒精火焰上来回通过几次，略做加热固定。 如有多个样品同时需要制成抹片，只要染色方法相同，亦可在同一张玻片上有秩序地排好，做多点涂抹，或者先用蜡笔在玻片上划分成若干小方格，每方格涂抹一种样品。 （2）染色：染色步骤为： 在已干燥、固定好的抹片上，滴加草酸铵结晶紫溶液，经1—2min，水洗。 加革兰氏碘溶液于抹片上媒染，作用1—3min，水洗。 加95％酒精于抹片上脱色，约0．5～1min，水洗。 加稀释的石炭酸复红(或沙黄水