衍生于双氰基二苯代乙烯的用于活体成像的双光子荧光锌离子探针.PDF

Vol.36 高等 学校 化 学 学报 No.4 2015年4 月 摇 摇 摇 摇 摇 摇 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES摇 摇 摇 摇 摇 摇 646~653 doi:10.7503/ cjc 摇 摇 衍生于双氰基二苯代乙烯的用于活体成像的 双光子荧光锌离子探针 1,2 1 1 1 1 2 2 黄池宝 ,梁摇 兴 ,曾启华 ,陈华仕 ,曾伯平 ,易道生 ,陈晓远 (1. 遵义师范学院化学化工学院,遵义563002; 2. 韶关学院英东农业科学与工程学院,韶关512005) 摘要摇 制备了衍生于双氰基二苯代乙烯的双光子荧光锌离子探针,该探针以4鄄(2鄄吡啶甲基)哌嗪为锌离子 受体,当络合锌离子时,探针的荧光强度增强了72郾5倍和580 GM 的双光子吸收截面. 该探针无细胞毒性且 TP 在体内环境中无pH敏感性,其解离常数K =(0郾52依0郾01) 滋mol/ L. 性能测试结果表明,该探针能选择性地 d 检测活细胞中的游离锌离子,耐时长达约1500 s,且能探测活体组织80 ~150 滋m深处的锌离子,不受其它 金属离子与生物膜的干扰. 关键词摇 双光子荧光探针;锌离子;活体成像;双光子发射截面 中图分类号摇 O655郾25摇 摇 摇 摇 文献标志码摇 A 2+ 2+ 生物体内的Zn 是继Fe 之后的第二个含量较为丰富的重金属离子,在许多生理过程中起着重要 [1,2] 作用 . 锌不但广泛参与各种生命活动的生化过程,同时也是生命体的构成元素. 自1987 年第一个 [3] [4] [5] 锌离子荧光探针(TSQ) 被合成以来,已研制出多种锌离子单光子荧光探针,如Zinquin ,ZnAF , [6] [7] [8] [9] [10] Zinpyr ,FluoZin鄄3 ,TFLZn ,ACF鄄1,ACF鄄2 和Bis鄄terpyridinyl鄄calix 等,这些单光子荧光探针 2+ 能方便快捷地检测Zn ,但在检测时易导致光致毒及光漂白,易受组织自发荧光的干扰,只能用于组 织或细胞的浅层成像. 为了克服这些问题,双光子锌离子探针被陆续开发,但其检测性能尚不够理想, 亟待开发性能更优良的双光子锌离子探针[11~14]. 本文以双氰基二苯代乙烯(DCS)作为双光子荧光母体,设计开发了性能优良的双光子荧光锌离子 探针(DZn),该探针以双氰基二苯乙烯[15,16]作为双光子荧光团,以4鄄(吡啶鄄2鄄甲基)哌嗪(PMP)作为 锌离子受体. 对该探针的光物理性质、对离子的识别作用及细胞成像进行了研究. 1摇 实验部分 1.1摇 试剂与仪器 N,N,N忆,N忆鄄四(2鄄吡啶基)乙二胺(TPEN)、S鄄亚硝基半胱氨酸(SNOC)、 乙二醇鄄双鄄(2鄄氨基乙醚) 四乙酸(EGTA)、3鄄(N鄄吗啉代)丙磺酸(MOPS)、胎牛血清(FBS)、磷酸盐缓冲液(PBS)、达尔伯克 (氏)改良伊格尔(氏)培养基(DMEM)、人工脑脊髓培养液(ACSF+138郾6 mmol/ L NaCl+3郾5 mmol/ L KCl+21 mmol/ L NaHCO +0郾6 mmol/ L NaH PO +9郾9 mmol/ L D鄄gl