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课题1 微生物的实验室培养 （一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 基础知识 （1）按物理状态来分： 固体培养基和液体培养基。固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。 1.培养基的类型和用途 （2）按功能来分:选择培养基和鉴别培养基。 （3）按成分来分:天然培养基和合成培养基。 液体培养基 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 固体培养基 半固体培养基 2.培养基的成分 一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 1.概念 （二）无菌技术 （1）消毒： 　　用较为温和的化学或物理方法杀死物体表面或内部的部分致病微生物的过程。 2.消毒与灭菌的概念及区别 （2）灭菌： 用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒。 （1）消毒的方法 3.常用的消毒与灭菌方法 （2）灭菌的方法 灼烧灭菌 干热灭菌： 160-170℃下加热1-2h。 （玻璃器皿，金属工具） 高压蒸气灭菌： 100kPa、121℃下维持 15-30min。 （培养基与容器灭菌） 牛肉膏蛋白胨固体培养基配方 牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 将上述物质溶解后，添加自来水，定容至1000mL （二）无菌技术 (一)制备牛肉膏蛋白胨培养基 1．计算 2. 称量 3．溶化 4．调pH：pH7.6　 5．灭菌：培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌股） 培养皿的灭菌）（干热灭菌箱） 6．倒平板 培养基冷却至50℃，酒精灯火焰旁 2.操作步骤 （1）.将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拨出棉塞。 A B C D 3.倒平板技术 （2）.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰。 A B C D （3）.用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10~20mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。 A B C D （4）.等待平板冷却凝固大约需5~10min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。 A B C D 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 问题讨论 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 问题讨论 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 问题讨论 （二）纯化大肠杆菌 1.平板划线法： 菌种 接种环 平板划线接种 第一区域 第二区域 第三区域 第四区域 第五区域 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 问题讨论 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 问题讨论 问题讨论 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 101 102 103 104 105 106 2.稀释涂布平板法： （1）梯度稀释菌液： (2) 涂布平板： 不超过0.1ml 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 接种后的培养基和未接种的培养基都放入37℃恒温箱中，培养12h和24h后，分别观察并记录结果。 1.涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ (1)酒精灯与培养皿的距离要合适; (2)吸管头不要接触任何其他物体; (3)吸管要在酒精灯火焰周围使用等。 问题讨论 2.结果是否都可在培养基表面形成单个菌落？ 不是 1.临时保藏： 接菌种到试管的固体斜面培养基上，形成菌落后，4℃冰箱中保藏 缺点：保存时间短，菌种易被污染、变异 2.长期保存： 甘油管藏，1ml甘油（灭菌）＋1ml菌液，－20℃冷冻箱中保藏 菌种保藏 四.课题延伸 1．下列叙述正确的是（ ） A.为微生物的生长繁殖提供营基质的是固体培养基 B.培养