水稻叶片中丙二醛MDA含量的测定.pdf

/e1010148 DOI:10.21769/BioProtoc.1010148 水稻叶片中丙二醛(MDA)含量的测定 Determination of Malondialdehyde (MDA) Content in Rice Leaves 都浩，王妮丽，熊立仲* 作物遗传改良国家重点实验室，华中农业大学，武汉 *通讯作者邮箱：lizhongx@ 引用格式：都浩，王妮丽，熊立仲. (2018). 水稻叶片中丙二醛(MDA)含量的测定. Bio-101 e1010148. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010148. How to cite: Du, H., Wang, N. L. and Xiong, L. Z. (2018). Determination of malondialdehyde (MDA) content in rice leaves. Bio- 101 e1010148. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010148. (in Chinese) 实验原理：水稻器官衰老或在非生物逆境条件下，膜脂发生过氧化作用，丙二醛 (malondialdehyde)是其产物之一，通常利用它作为膜脂过氧化指标。MDA 在高温及酸 性条件下与TBA 反应形成有色物，在532 nm 波长处有最大吸收值，600 nm 波长处 有最小吸收值。 实验目的：检测水稻在非生物逆境胁迫前后膜脂的过氧化程度，检测水稻细胞膜对非 生物逆境反应的强弱。 关键词：水稻，生理指标，丙二醛，非生物逆境 材料与试剂 1. 冰盒 2. 塑料袋 3. 1.5 ml、10 ml 离心管 4. TCA (三氯乙酸) 5. TBA (硫代巴比妥酸) 6. 10% TCA (见溶液配方) 7. 5% TCA (见溶液配方) 8. 0.67% TBA (见溶液配方) Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1 /e1010148 DOI:10.21769/BioProtoc.1010148 仪器设备 1. 剪刀 2. 研钵 3. 100 ml 容量瓶 4. 天平 5. 冷冻离心机 6. 电磁炉 7. 比色皿及分光光度计(DU640) 实验步骤 1. 冰盒取样水稻叶片样品，置于封闭的塑料袋中，带回实验室立即测定。 2. 天平称取0.5 g 水稻叶片，剪刀剪碎后加5% TCA (见溶液配方) 5 ml，用预冷的研 钵置于冰上研磨至匀浆状，倒入10 ml 离心管中。 3. 在3,000 rpm 下冷冻(4 °C)离心10 min，取上清液2 ml 至新的10 ml 离心管中，向 其中加入0.67% TBA (见溶液配方) 2 ml，混合后在100 °C 沸水中煮30 min，室温 自然冷却后取1.5 ml 上清至新1.5 ml 离心管中，室温12,000 rpm 离心后取上清。 4. 用分光光度计分别测定上清液在450 nm 、532 nm 和600 nm 处的吸光度值。并按 公式算出MDA 浓度，再算出单位鲜重组织中的MDA 含量(μmol/g)。 5. 结果计算，按公式 C/μmol/L = 6.45 (A532-A600) - 0.56 A450 式中A450 、A532 、A600 分别代表450 nm 、532 nm 和600 nm 波长下的吸光度值。 注意事项 1. 检测生理指标的水稻组织质量应该一致，保证较好的实验结果。 2. 检测植物生理指标所用试剂，最好现配现用。 3. 用分光光度计测定吸光度时应注意分光光度计的测定范围。 溶液配方 1. 10% TCA 称取10 g TCA，使用ddH O 溶解，转移至100 ml 容量瓶中定容 2 Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 2 /e1010148