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第十章 目的基因的分离 吴 乃 虎 中国科学院遗传与发育生物学研究所 第十章 目的基因的分离 一、引言 基因分离技术发展简介 基因分离技术迅猛发展的客观要求 目的基因的分离 二、分离克隆基因的若干主要方法 应用核酸探针分离克隆的目的基因 应用差别杂交法或扣除杂交法分离克隆的目的基因 低丰度mRNA之cDNA末端的快速扩增RACE法 根据蛋白质家族的保守序列鉴定新的相关基因 通过表达载体分离特异的cDNA 三、应用mRNA差别显示技术分离目的基因 引言 mRNA差别显示原理 mRNA差别显示实验过程及其局限性 四、DNA标签法分离目的基因 原理 转位子标签法 T-DNA标签法 五、酵终双杂交与单杂交体系 酵母双杂交体系 酵母单杂交体系 酵母三杂交体系 第十章 目的基因的分离 一、引言 1．基因分离技术发展简介 *1.在上个世纪70年代中期已经具备了分离基因的能力 这主要是取决于当时重组DNA技术的发展水平，特别是发展出了安全的寄主菌株和克隆载体： 第一个安全的大肠杆菌寄主菌株——X1776品系的诞生 第一批安全适用的克隆载体pM19和pBR322的问世 在上述这两个条件的基础上，分子生物学家成功地克隆出第一批基因。 *2.在上个世纪70年代末期克隆基因分离的能力明显提高 这主要应归功于基因克隆策略的改变。由于发展出了改良的寄主菌株和克隆载体，人们提出了先克隆cDNA再分离