高效液相色谱仪的使用与维护.ppt

按ChP测定供试品前应先按各品种项下要求用规定的对照品进行色谱系统适用性试验。如达不到要求，可对色谱分离条件作适当的调整。 可以改变：色谱柱的尺寸、牌号、填料粒度、流动相的配比及流速、梯度洗脱时间、柱温、进样量等。 不可改变：固定相种类、流动相组成、检测器类型及波长。 建立方法时从方法学角度优化色谱参数，使其达到分离度、重现性好。 容器：塑料容器常含有高沸点的增塑剂，可能释放到样品液中造成污染，而且还会吸留某些药物，引起分析误差。 某些药物特别是碱性药物会被玻璃容器表面吸附，影响样品中药物的定量回收，因此在做痕量物质检测时最好应将玻璃容器进行硅烷化处理。 样品测定时注意问题 测定杂质含量时，按各品种项下规定的杂质限度将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液作为对照溶液，进样，调节检测灵敏度(以噪音水平可接受为限)或进样量(柱子不过载为限)，使对照溶液的主成分色谱峰的峰高约达满量程的10％～25％或其峰面积能准确积分。 测定方法 内标法加校正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量。 外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量。 加校正因子的主成分自身对照法。 方法：测定杂质含量时，按各品种项下规定的杂质限度将供试品溶液稀释成与杂质限度相当的溶液作为对照溶液，进样，调节检测灵敏度，使对照溶液的主成分色谱峰的峰高约达满量程的10％～25％或其峰面积能准确积分 然后，取供试品溶液和对照品溶液适量，分别进样，供试品的记录时间除另有规定外，应为主成分色谱峰保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱图上各杂质的峰面积。 准确积分的涵义 C＜0.5% 对照液峰面积的RSD＜10% 0.5%≤C≤2%, RSD＜5% C＞2%， RSD＜2% 供试品溶液的记录时间，除另有规定外，应为主成分色谱峰保留时间的2倍。 若供试品所含的部分杂质未与溶剂峰完全分离，则按规定先记录供试品溶液的色谱图I，再记录等体积纯溶剂的色谱图Ⅱ。色谱图I上杂质峰的总面积(包括溶剂峰)，减去色谱图Ⅱ上的溶剂峰面积，即为总杂质峰的校正面积。然后依法计算。  蒸发光散射检测器简介 一、仪器原理及仪器使用注意事项 蒸发光散射检测器（ELSD）从理论上讲，它能够分析任何挥发性低于流动相的化合物。ELSD的响应不依赖于样品的光学特性，因此ELSD可以检测不带发色团或荧光基团的样品，特别适用于碳水化合物，脂类，甘油三脂，未衍生的脂肪酸和氨基酸，聚合物，表面活化剂等样品的检测。 蒸发光散射检测器的检测过程： 分为雾化、（分流），蒸发，聚焦和检测几个过程。其中雾化和蒸发是在雾化管中进行的。 检测原理 由色谱柱流出的洗脱液在雾化器中与雾化气体（可用氮气或空气）混合（雾化过程）；混合的雾状气液体在雾化器中形成由液滴组成的气溶胶，大颗粒的气溶胶落入雾化器的底部被排出（部分分流），而组成均匀的气溶胶进入加热的漂移管（又称蒸发管），溶剂在漂移管中蒸发，形成不挥发性的气溶胶（蒸发过程），气溶胶进入光散射检测器。 雾化： 流动相及经色谱柱分离后首先进入雾化器中, 通过喷雾器针孔与雾化气体（可用氮气或空气）混合, 在雾化器中形成均匀分布的由雾状液滴组成的气溶胶， 蒸发：气溶胶进入加热的漂移管，溶剂在漂移管中蒸发，形成不挥发性的气溶胶（薄雾状的样品颗粒）。 不挥发性的气溶胶进入光散射检测器，检测光聚焦在气溶胶的颗粒上。被 “撞击” 后散射，形成散射光，由光电二极管接收散射光产生信号 气体流量越大蒸发速度越快，形成的液滴越小，因此雾化器中的气体流量影响雾化管中形成的液滴的大小。由于小颗粒散射光少，大颗粒散射光多，因此需通过实验选择最佳气体流量，使液滴颗粒适当增大以提高分析灵敏度。 最佳气体流量应是在可接受的低噪音条件下产生最大峰面积时的最低流量。 使用多溶剂组成的流动相时，应根据说明书中所列各溶剂的初始温度和初始气体流量，按混合溶剂的比例，计算所需的初始温度和气体流量。 漂移管温度：漂移管的温度选择范围为25℃?115℃。漂移管的蒸发温度取决于流动相的组成和流速以及样品的挥发性。流动相中有机溶剂比例越高，所需漂移管温度越低。流动相流速越高要求漂移管温度越高。 最佳漂移管温度是产生可接受的低噪音基线时的最低温度。 流动相流速减低时，漂移管温度可以适当降低。流动相挥发性低时漂移管温度可以适当降低。 撞击器“关”的模式一般比撞击器“开”的模式需要的漂移管温度高。 蒸发光散射检测器色谱参数优化 撞击器on 或 off： 选择撞击器“开”还是“关”取决于流动相的组成、流速及样品的挥发性。 “撞击器关” （IMPACTOR OFF）适用于含高比例有机溶剂流动相，流速小于1.5mL / min时进行非挥发性样品的分析；或用高比例成分的