细胞相关生物学行为分析方法课件.pptx

第三讲 细胞相关生物学行为分析方法 Methods for the research of cell behaviors ;一、细胞增殖动力学检测方法;一、细胞增殖动力学检测方法 (1)生长曲线的测定;一、细胞增殖动力学检测方法 (1)生长曲线(growth curve)的测定;一、细胞增殖动力学检测方法 (1)生长曲线的测定;一、细胞增殖动力学检测方法 (1)生长曲线的测定;一、细胞增殖动力学检测方法 (1)生长曲线的测定;一、细胞增殖动力学检测方法 (2)分裂指数(mitotic index)测定;一、细胞增殖动力学检测方法 (3)BrdU掺入法测定细胞增殖指数;一、细胞增殖动力学检测方法 (4)集落形成(colony forming)实验;一、细胞增殖动力学检测方法 (4)集落形成实验;二、细胞凋亡(apoptosis)检测技术;二、细胞凋亡检测技术 (1)形态观察;二、细胞凋亡检测技术 (2)DNA琼脂糖凝胶电泳agarose electrophoresis;二、细胞凋亡检测技术 (3)凋亡细胞原位末端标记法（TUNEL）;二、细胞凋亡检测技术 (4)流式细胞仪检测凋亡（PI单染色）;二、细胞凋亡检测技术 (4)流式细胞仪检测凋亡（AnnexinV-PI双染色）;三、细胞迁移/侵袭检测技术;三、细胞迁移(migration)/侵袭(invasion)检测技术;三、细胞迁移/侵袭检测技术 (1)Transwell 法检测细胞迁移;三、细胞迁移/侵袭检测技术 (2)划线法检测细胞迁移;三、细胞迁移/侵袭检测技术 (3)Transwell法检测细胞侵袭;三、细胞迁移/侵袭检测技术 (4)微流控法检测细胞迁移、侵袭;VEGF诱导内皮细胞迁移 Migrating cells into soft (pH 7.4) and rigid (pH. 11.0) scaffolds were studied. Cells were stained for actin by Rhodamine-phalloidin (yellow) and nuclei by DAPI (blue).;共培养条件诱导内皮细胞迁移 MTLn3： GFP-expressing rat mammary adenocarcinoma cells (乳腺癌细胞) U87MG： GFP-expressing human glioblastoma cell line （胶质瘤细胞） 10T ?： Mouse smooth muscle precursor cells （平滑肌祖细胞）Cells were stained for actin by Rhodamine-phalloidin (yellow) and nuclei by DAPI (blue). HMVEC （内皮细胞）were stained for vWF(green) to distinguish them from 10T 1/2.;四、细胞生物力学特性检测技术 (1)微管吸吮技术(Micropipette Aspiration Technique, MAT);Long M, 2007, JBC, Two-dimensional Kinetics of P-selectin-PSGL-1 Interactions;四、细胞生物力学特性检测技术 (2)光镊技术(optical tweezers);四、细胞生物力学特性检测技术 (2)光镊技术;分子水平上： 1. 操控生物大分子，如DNA的扭转打结，可使DNA分子比肌动蛋白还强壮，用于缝合细胞和神经的细微手术； 2. 研究单分子力学特性，如DNA折叠动力学，蛋白运动特性等；‥‥‥;四、细胞生物力学特性检测技术 (3)原子力显微镜(atomic force microscope ,AFM);Phase contrast image (top left), Fluorescence image (bottom left), AFM height image (top right, scan range 0 - 3.2 μm) and AFM deflection image (bottom right) of living REF52 fibroblast cells, expressing GFP-paxillin, imaged in buffer, at 37 degrees. dimensions 80 μm × 60 μm ;;AFM检测细胞/分子间相互作用interactions between cells or molecules;四、细胞生物力学特性检测技术 (4)磁力扭转(magneti