医学细胞生物学实验培训课件.pptVIP

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2019-05-03 发布于湖北
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医学细胞生物学实验培训课件.ppt

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医学细胞生物学实验徐志浩遗传与基因工程教研室院系楼西侧一楼 2016年精品文档掌握细胞冻存与复苏的原理。熟悉细胞冻存复苏的一般操作过程。掌握细胞计数的一般方法。医学细胞生物学实验实验目的细胞冻存的必要性冻存温度冻存操作对细胞的损伤：冰晶损伤、溶液损伤冻存保护剂冻存复苏的原则：慢冻速融实验原理精品文档 1、细胞冻存医学细胞生物学实验 1ml鸡血+1ml生理盐水→1500rpm离心5min(配平)→弃上清→加2ml冻存液→混匀 (空气吹打法) →分装至1ml的冻存管→标记→液氮罐口（-60~-70 ℃ ）10min →液氮中冻存10min （-196℃ ）。无菌操作; 保护剂；细胞浓度；梯度降温（慢冻）；防止冻伤；防爆；冻存管做好标记。精品文档 2、细胞复苏与计数医学细胞生物学实验取出冻存管→ 37℃水浴1min融化→转入离心管→加至5ml培养液→混匀→ 1500rpm离心5min→弃上清→加1ml培养液→混匀→取0.5ml →加入等体积台盼蓝→染色1min →计数 → 计算细胞活力和细胞浓度。如何区别死细胞和活细胞？细胞活力（率）：活细胞所占的比率。精品文档 3、细胞计数板的使用医学细胞生物学实验计数之前熟悉计数板构造并熟练掌握计数方法。使用计数板前用酒精棉球轻轻擦拭干净。先盖盖玻片，再滴细胞悬液。压线细胞：计上不计下、计左不计右。计数方向：按一定顺序。 1mm 1mm 0.1mm 0.1mm3 10-4ml 7.5cm 3.5cm 精品文档