2实验二 凝、沉淀反应.ppt

实验二  凝集、沉淀反应;实验目的;1.直接凝集反应：颗粒性抗原与相应抗体结合后所呈现的肉眼可见的凝集现象。 。 2.沉淀反应：可溶性抗原与相应抗体在适当条件下结合而出现的沉淀现象。 ; 伤寒杆菌诊断血清、伤寒杆菌菌液、生理盐水、 载玻片、接种环、记号笔、酒精灯；琼脂板、打孔器、针头、毛细滴管、待测血清、 AFP阳性血清、AFP诊断血清（兔抗人AFP ）等。 ;抗原抗体反应又称血清学反应，主要有： 1、凝集反应 2、沉淀反应 3、补体参与反应 4、中和反应 5、免疫标记技术;一、凝集反应 (一)概念 颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体结合，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反应。;原理 　 玻片凝集试验是一种快速简便的检测方法，即抗原抗体的反应在玻片上进行，是一种定性的试验。用已知抗体检测未知抗原。 　　本试验用已知的伤寒杆菌标准诊断血清鉴定未知细菌。; 取洁净玻片1张，用蜡笔划分2等份，如下图所示 ； 无菌操作，用接种环分别于一、二格内各加2～3环伤寒杆菌诊断血清、生理盐水； 用接种环取待测菌液，分别涂布于生理盐水和伤寒血清中，混匀； 轻轻摇动玻片，1~2分钟后观察结果。 ;盐水侧无凝集颗粒； 血清侧出现肉眼可见的凝集块为阳性，仍为均匀一致乳浊液者为阴性。;经典抗原抗体反应的一种。 分类: 琼脂扩散 环状沉淀反应 絮状沉淀反应 免疫电泳; 琼脂扩散试验： 琼脂是一种含有硫酸基的多糖体，高温时溶于水，冷却后凝固，形成凝胶，呈多孔结构，充满水分，允许各种抗原抗体分子自由扩散。二者于比例适当处相遇，发生沉淀，形成可见的沉淀带。;（一）单向琼脂扩散试验 （示教）;单向琼脂扩散实验:;（二）双向琼脂扩散试验 （操作）;材料： 待测血清、 AFP阳性血清、AFP诊断血清（兔抗人AFP ）、生理盐水、琼脂板、打孔器、针头、毛细滴管、酒精灯。 ;1、制备琼脂板： 1%盐水琼脂加热溶化，取5ml均匀铺与载玻片上。 2、打孔： 琼脂凝固后，用打孔器打孔成梅花型，针头取出孔中琼脂。 3、封底： 用酒精灯轻烤平皿底部至琼脂刚???要熔化为止，封闭孔的底部，以防侧漏。 4、加样： 中间孔加抗AFP抗体，1、4孔加AFP阳性对照，2、3孔加待检血清，5、6孔加生理盐水。 5、反应： 于湿盒，37?C 24h。;3;1、琼脂板一定平整、光滑 (无气泡)，琼脂不可过厚； 2、打孔不要划破边缘； 3、加样要加满而不溢出为止； 4、合理分配吸管，Ag、Ab吸管不能混淆。;凝集反应与沉淀反应的比较;思考题;作业;谢谢