离子通道筛选方案.PDF

一、离子通道筛选方案 离子通道药物筛选简介 离子通道是一类由基因编码，位于细胞膜上的跨膜蛋白， 是各种无机离子跨膜被动运输的通路。现已有406种编码离子 通道的人类基因被鉴定出来，可分为100类左右。离子通道广 泛分布于每一种细胞上。细胞膜上离子通道的结构和功能正常 是维持生命过程的基础，因基因突变或药物作用而导致的离子 通道结构改变和功能障碍与一系列疾病的发生和发展有关，被 称作离子通道病。近年来，以离子通道为靶点的药物开发也越 来越受关注，成为药物筛选的第三大靶点。 另一方面，在药物早期的安全性筛选过程中，对hERG通道 的毒副作用检测已经变成必需的步骤。hERG通道产生的电流 是心室复极中最重要的电流。通道被药物抑制后直接导致Long QT综合症，很可能演变成尖端扭转型室性心动过速，心室纤 颤，直至猝死。 目前发现几乎所有的临床药物所至的LQT或者 TdP都作用于hERG，且导致hERG抑制的药物在化学结构上 没有明显的共性，从而很难预测，仅有通过实验的方式给予解 决。2004年, ICH和美国FDA都颁布关于非临床检测Ikr(其中 主要是hERG)的规章，要求药物上市时必须提供作用于离子通 道的电流变化数据，否则新药不得用于临床。为此,新的早期药 物安全评测方式需要引入制药研发过程中，以便及早发现候选 化合物潜在的心脏毒性，尽可能减少新药研发的投资与风险。 目前，除膜片钳制外能用于离子通道大规模药物筛选的方 离子通道相关疾病- 目标分子 法主要有： ● Radioligand binding assay ● Fluorescent dye probes: 如calcium-sensing dye 和 voltage-sensing dyes ● Ion flux assay : 包括Radioactive ion flux assay和AAS， 一种用非放射性元素做离子示踪剂的方法。 ● 膜片钳技术 药物安全性评估-非 目标分子 1 Molecular Devices 为离子通道提供的解决方案 20多年来，MD公司为离子通道的药物筛选作出了杰出的贡献，从科学仪器到相关的试剂，通过多年的不懈努力，MD的 系列产品为以离子通道为靶点的药物开发提供了完整的解决方案。MD公司的FLIPR用于检测使用荧光染料标记的细胞内钙 和膜电位敏感的荧光染料实时变化，被各大公司广为使用。 一. 荧光染料标记法 1. 钙敏感荧光染料 一些离子通道对钙离子通透，当被激活时，会引起细胞内 目前，Molecular Devices推出荧光Calcium 4 Kit和 钙离子浓度增高。因此使用钙敏感的荧光染料标记细胞内钙 Calcium 5 Kit 免洗试剂盒，实验步骤简单，操作方便，且用 离子，实时监控细胞内钙离子浓度变化，可间接检测离子通 于孵育的染料无需洗脱，受到广大客户欢迎。Molecular 道的活动。 Devices的仪器FLIPR 和Flexstation 3可用来实时监测钙离 子的荧光信号变化。 应用实例 使用钙敏感荧光染料和FLIPR监测HTRPV1通道的活动。 Compound Calcium 4 Calcium 5 Fluo-4 Direct