使用表面带电杂化CSHC18和不含TFA的流动相进行肽图.pdf

[ 应用纪要 ] CSHC18TFA Matthew A. Lauber, Stephan M. Koza,和 Kenneth J. Fountain 沃特世公司(美国马萨诸塞州米尔福德) ■ 与其他C18色谱柱相比，CSH130具有 当用作质量控制时，生物药物的肽图分析在传统方法上都会涉及使 更大峰容量和独一无二的选择性 用紫外吸收进行检验。但是，为表征肽图中的化合物，常常必须将 LC分离与ESI-MS联合使用。含有三氟乙酸(TFA)的流动相几乎专用于肽 ■ 能与甲酸和ESI-MS兼容 图分析，这很可能是因为许多C18色谱柱的性能高度依赖于改善峰形 的强离子对试剂。对于LC/MS应用，由于发生离子抑制，最好避免使 ■ 实现对高达约10 kDa化合物的高分 用强离子对试剂(例如TFA)，从而可使MS信号强度增加一个数量级。 辨率分离 1-3离子配对能力低的弱酸改性剂(例如甲酸[FA])是LC/MS的首选，因为 4-5 它们更容易实现更灵敏的检测 。 ■ CSH130 C18用细胞色素c胰蛋白酶消 6 化液进行QC质控 在另一篇应用纪要中 ，新型含有低水平正电荷的C18色谱柱与现有先 进的肽分析色谱柱进行了对比。对9种肽混合物的分析结果证明，表 面带电杂化(CSH™)C18固定相能够带来更高的峰容量，并且对强离子 对的依赖性很小，这与大部分色谱柱产品的强烈依赖性不同。 这种 性质对于需要使用质谱表征的LC应用而言非常理想。 在本研究中，CSH130 C18联合FA流动相被进一步应用于更严苛的分离 中。在CSH130 C18、BEH130 C18和表面多孔型C18色谱柱上，对烯醇酶胰 蛋白消化液的LC/MS分析进行了对比。此外，还对这些色谱柱在分子 量高达12 kDa多肽分离中进行了评估。 ACQUITY UPLC® H-Class Bio 系统 Xevo® G2-S Q-Tof™质谱仪 ACQUITY UPLC CSH130 C18， 1.7 µm色谱柱 MassPREP™烯醇酶解标准品 经LCGC认证的含内插管的 透明玻璃样品瓶 反相、肽、UPLC® 、三氟乙酸、 TFA 、甲酸、FA、离子对、表面带 电杂化、CSH、C 18、CSH130 C 18、 LC/MS、肽图、小分子蛋白质 1 [ 应用纪要] LC 流动相： A 0.1%FA (v/v)水溶液 B 0.1%FA (v/v)的乙腈 系统： Waters ACQUITY UPLC H-Class (ACN)溶液 Bio系