生物样品预处理.docVIP

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PAGE PAGE 20 生物材料检验备课笔记 授课对象 05检本 授课时间 2008-9-22 章节 绪论 第三节 生物材料样品的预处理 教学内容 第三节 生物材料样品的预处理 (Pretreatment of Biological Material Samples) 一 概述 (Conception) 生物材料检验涉及的样品组成十分复杂,除了无损分析外,在分析前,一般要检测生物材料样品中的有关组分,需要先将它们从样品材料中分离、提取、净化、浓缩出来,然后才能进行测定。这一分离、提取、净化、浓缩等过程,我们称为生物材料样品的预处理。所用分离、提取、净化、浓缩的方法,取决于以下一些条件:如待测物质在生物材料中的存在形态,待测物的分子结构、理化性质,以及生物材料中共存的可能干扰测定的因素等。 1.1 样品预处理的目的 (Projects of Sample Pretreatment) 大多数生物材料样品中待测物质多以多相非均一状态的形式存在。样品的预处理通常有以下6个目的: ⑴分离被测组分; ⑵浓缩被测组分,以提高检出的灵敏度; ⑶消除共存组分对待测物测定的干扰; ⑷通过生成衍生物等方法,使一些通常难以检测的待测物转化为具有较高响应信号的化合物; ⑸使预处理后的样品更易保存和运输; ⑹除去样品中对分析仪器有害的组分,延长仪器使用寿命。 1.2 样品预处理在生物材料检验中的地位 (Status of Sample Pretreatment within Laboratory Analysis of Biological Materials) 一个完整的生物材料检验过程,应包括样品采集、样品预处理、分析测定、数据处理和撰写报告五个步骤。统计资料显示,以上各步所需时间占全部样品检验工作时间的百分率大致为:样品采集6.0%,样品预处理61%,分析测试6.0%,数据处理与报告结果27%。其中样品预处理所需时间占去整个分析时间的60%以上。用于样品预处理的时间是样品分析测试所需时间的10倍以上。一般情况下,分析一个样品只需几分钟到几十分种,而样品预处理却要花几个小时乃至几十个小时。因此样品预处理方法与技术的研究一直是生物材料检验工作者极其关注的问题。对各种生物材料样品预处理新方法、新技术的探索、研究与完善,已成为重要的研究课题和发展方向之一。 1.3 生物材料样品预处理方法的评价 (Evaluation of Pretreatmental Methods on Biological Material Samples) 目前,生物材料样品预处理方法多达数十种,但没有一种预处理方法能适合所有样品或所有组分。同一种待测物在不同的生物材料样品中,也得采用不同的预处理方法。选择预处理方法时应考虑样品和待测物的理化性质、被测物的含量水平、共存干扰物质含量,以及所采用的分析方法等因素, 评价生物材料样品预处理方法是否合理、适用,应关注以下几项原则: (1)所选方法应能最有效地分离出待测组分,并除去影响测定待测物的干扰组分; (2)待测组分的回收率要足够高; (3)操作简便、省时; (4)尽可能减少化学试剂的用量, 要设法做到循环使用。 (5)操作过程安全性高,预处理程序对生态环境和人体健康无不良影饷, 尽量避免使用昂贵的试剂和仪器,以保持成本低廉。对于一些新型高效、简便可靠而自动化程度又很高的样品预处理技术,尽管所需仪器的价格较为昂贵,但因其效率和效益显著,必要的投资也应予以考虑。 下面对一些常见的样品预处理方法分别予以介绍。 二、无机元素分析的样品预处理方法 (一)稀释法 有的样品可不经复杂的预处理过程,如血清、组织液等本身为液体的样品,在测定其中的金属元素含量时,可用水、稀酸溶液、含表面活性剂(如Triton X-100)或有机溶剂(如正丁醇、乙酸乙酯)的水溶液简单稀释后测定。如血清样品可用6%正丁醇水溶液或1%硝酸水溶液稀释10倍后用火焰原子吸收法测定其中铜、铁、锌等;全血可用0.01%Triton X-100水溶液稀释后测定。如基体效应对测定影响大,也可用基体改进剂的溶液稀释后测定。 毛发、软组织、指甲、骨、牙等固体样品也可用适宜的溶液溶解后测定。如用25%四甲基氢氧化铵的乙醇溶液溶解骨、指甲、毛发、软组织等,用原子吸收法测定其中的铜、锰、锌、铅、镉等的含量。 (二)酸提取法 用酸溶液直接从样品中提取待测成分,不需完全分解破坏有机物,只需将待测成分定量转移到溶液中,故所用试剂量比较少,处理过程简单,处理条件温和,空白值低且造成待测成分损失或污染的可能性小。但需注意基体干扰和提取效率是否能达到分析要求。例如,用1mol/L HCl浸提粪便中的锌;用2mol/L HCl 于60℃ (三)矿物化法 绝大多数生物材料样品都是

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