从细胞色素b基因序列探讨我国林蛙属动物的系统发生关系.pdf

维普资讯 动 物 学 研 究 2001．Oct．22 5【)：345—350 CN 53—1040／Q ISSN0254—5853 ZoologicalResearch 从细胞色素 b基因序列探讨我国林蛙 属动物的系统发生关系 杨学干 王义权① 周开亚 刘中权 (南京师范大学遗传斑操研究所 南京 210097 摘要 ：对中国林蛙属动物进行 了DNA水平的分子系统发生研究，测定了中国林蛙属 7种 15个样品、侧褶 蛙属 2种 2个样品Cyt6基因长约360bp片段的序列 对这些序列的系统发生分析表明：①中国林蛙甘肃种群 与东北种群序列差异较大 ，但 尚难根据序列差异来判断它们是不同的亚种还是不 同的物种 ；07种林蛙 中，中 国林蛙与黑龙江林蛙的亲缘关系最近 ，与桓仁林蛙最远 ；③支持将昭觉林蛙、镇海林蛙、峨眉林蛙和长肢林蛙 归八 日本林蛙种组 Ranajaponicagroup。 关键词 ：林蛙属；细胞色素 b基 因；系统发生关系 中图分类号：Q959．53，Q951 ．3，Q349 ．5 文献标识鸹 ：A 文章编号：0254—5853(2001)O5—0345—06 林蛙类原隶属蛙科 (Ranidae)蛙属 (Rana)，费梁 1 材料和方法 等 (1990)将原来 的蛙属 (Rana)重新划分为 l1个 属，其 中林蛙类 (brownfrogs)单独成 属 即林 蛙属 1．1 材 料 (Rann) 共分析 7种林蛙属 (Rana)、2种侧褶蛙属 中国已知的林蛙约 1O种 ，为理清我国林蛙属物 (Petophytcax)动物的样品。所有样品的来源 、代码 种的多样性及亲缘关系 ，许多学者从形态学、细胞 及数量见表 1 学、动物地理学等不 同角度对中国的林蛙类进行 了 1．2 模板DNA的提取 研究(吴政安 ，1982；姜书庭等，1984；罗学娅和李家 取原动物肌肉约 0．05g置 1．5mL的Eppendorf 坤，】985；卢欣 ，1994；魏刚等，1991)，虽然解决了一 管中，加 人 町E液 (0Olmol／LTris—HC1，pH8．0， 些分类学与系统发生学问题 ，然而还存在争论 (谢锋 0．O1mol／LEDTA．0．1m01／LNaC1)0．5mL浸泡样 等，：995)。因此 DNA水平提供新 的、独立的证 品 然后再加入 10％ SDS100 L，20g／L蛋 白酶 K 据，是十分必要的 1OHL，2n1ol／LDDT20 L，55℃水浴数小时，其间轻 日本 学者 Tanaka “at．(1994，1996)；Tanaka— 摇数次，便于酶解。酚、氯仿抽提，乙醇沉淀，弃上 Uenoel ．(1998a，b)已用细胞色素 b(Cytb)基因 清，70％乙醇洗涤沉淀物 ，室温晾干，加人适量 TE 片段序列研究了日本国及其邻近国家和地区林蛙的 (O．01mol／LTris—HC1，pH8．0，1mmol／LEDTA)溶解 系统发生关系。本实验室 曾以线粒体 12SrRNA基 DNA，4℃保存备用 因片段的序列初步分析了中国产林蛙属6个种的系 1．3 Cytb基因片段的扩增和测序 统发生关系(江建平和周开亚，2001)。本文除上述 扩增 cvtb基 因片段 的引物为 L14847(5一A— 所用的6种林蛙样品外 ，增加了长肢林蛙 (R．tongi- CATCTCAGCATGATGAAAC_rrCGG 一3)和