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平板分离技术与活菌计数实验报告结果　实验一微生物培养基的配制和灭菌　一.实验目的：　1、明确培养基配制的基本原理；　2、掌握培养基配制的一般方法和步骤；　3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理和操作方法；　二.实验原理：　培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工　方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六　类营养要素。由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、　培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基。　培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、　合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。　灭菌是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、　芽孢和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。　常用加热灭菌法：　1、干热灭菌：　用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌　2、湿热灭菌　⑴高压蒸汽灭菌法　⑵间歇灭菌法　⑶煮沸消毒法　三、实验材料　每组同学需要准备以下材料：　?小试管：28支　?培养皿：60套　?移液管：7支(1000ml）、1支(10l)　?三角玻璃棒：1支　?　?　?　?　?　?　?瓷缸：1个三角瓶：4个玻棒：1支分液漏斗：1套药匙：1把记号笔：1支　四、实验步骤　培养基的制备过程　称量---溶解----调节pH值----过滤----分装及包扎----灭菌----灭菌后试管摆放斜面　1.称量　按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。　?配方：牛肉膏5g　蛋白胨10g　NaCl5g　蒸馏水1000ml　琼脂20g(另称于三角瓶中)　?2NNaOH配制：　1.量取80ml去离子水置于100-200ml塑料杯中。　2.称取8gNaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。　3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至于100ml。　4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。　?HCL配制：　1.在的去离子水中加入的浓盐酸，均匀混合。　2.室温保存。　本次实验的任务:　?配制牛肉膏蛋白胨液体培养基　600ml　100ml?准备1瓶90ml水　?7支试管　?3包培养皿　?5支移液管　2.溶解　向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌使其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂　的熔化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化　后，补足所失水分。　3.调节pH值　用玻璃棒沾少许液体，测量PH值。用氢氧化钠和盐酸调节PH。　4.过滤　用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。　5.分装及包扎　根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管内或三角瓶内，　管口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。　6.无菌水的制备　无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。250mL三角烧瓶，分别装自来水90mL和100mL，塞上棉塞，包扎、灭菌备用。　7.灭菌：高压蒸汽灭菌，1210C灭菌30分钟。　?操作过程　?加水?装锅?盖盖?加热?当压力升为/cm2时排放冷空气?正式升压?保压?停止加热?自然降压至零?排放余汽?开盖?取出灭菌物品?趁热摆斜面?检验灭菌效果。　8.灭菌后试管摆放斜面　当培养基冷却至50℃左右时，将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的斜面的长度不超过试管总长的一半。　注意事项　1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品；　2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速；　2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢；　4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，三角瓶的装量不超过瓶体的1/2；　5、分装过程中注意不要将培养基沾在管口上，以免沾污棉塞而引起污染。　五、实验作业　1.牛肉膏蛋白胨培养基属于何种培养基？　2.培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌?若不能及时灭菌应如何处理?已灭菌的培养基如何进行无菌检查?　3.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？　4.高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么待压力降低到“0”时才能打开排气阀，开盖取物？　实验二实验室环境和人体表面微生物的检测　一.实验目的：　1、证明微生物的存在；　2、体会无菌操作的重要性　二.实验原理：　平板培养基含有细菌生长所需的营养成分，将取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养2-4d，每一个菌体均繁殖成一个菌落。通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。　三、实验材料　每组同学需要准备以下材料：　?无菌牛肉膏蛋白胨平板：12套　?酒精灯：1个　?75%酒精　?记号笔：1支