氯吡格雷治疗后血小板高反应性的危险因素及可能机制的相关研究-老年医学（心血管内科）专业毕业论文.docx

解放军医学院博士学位论文第二部分：基础研究——糖尿病对氯毗格雷治疗后血小板高反应性影响的可能机 解放军医学院博士学位论文 第二部分：基础研究——糖尿病对氯毗格雷治疗后血小板高反应性影响的可能机 制研究 53 材料与方法 53 1．试剂及仪器 53 2．动物模型构建与分组 54 3．相关指标检测 54 3．1．血清学指标检测 54 3．2．血小板功能检测 55 3．3．血小板表面活性标记物CD62P的检测 55 3．4．胞质内钙离子水平的检测 56 3．5．Realtime—PCR检测目的基因的表达 57 3．6．Westem-blot检测目的蛋白的表达 57 4．数据处理 58 结 果 60 1．大鼠一般情况 60 2．血常规及普通生化指标情况 60 3．ELISA法检测血清学指标情况 61 4．血小板功能检测 62 5．流式细胞术检测情况 62 6．目的基因PKC、P2Y12、CYP450的表达水平 63 7．血小板相关检测指标与各指标之问相关性分析 64 讨{仑 67 参考文献 74 文献综述 81 参考文献 88 附 录 92 攻读学位期间发表文章及参加科研课题情况 97 致{射 98 万方数据 解放军医学院博士学位论文作 解放军医学院博士学位论文 作 者：邹晓 学科专业：老年医学(心血管内科) 导 师：范利教授 氯吡格雷治疗后血小板高反应性的危险因素 及可能机制的相关研究 中文摘要 目的：调查氯吡格雷治疗后血小板高反应性(Hi曲0n Treatnlem Platelet Reactiv时， HTPR)的发病率及危险因素，分析基因多态性特点及与HTPR的相关性：探讨 糖尿病导致氯吡格雷HTPR的可能机制，为HTPR临床防治提供理论依据。 方法：临床研究部分：顺序入选578例我院心内科行PCI治疗的冠心病合格患者， 年龄为62．39±12．22岁。给予标准双联抗血小板治疗阿司匹林(300mg)及氯吡 格雷(300mg)24h以上，或口服阿司匹林(100mg／天)及氯吡格雷(75mg／天) 3天以上。抽取血样检测血小板功能和提取基因组DNA采用MassA舢r法检测 单核苷酸多态性(single Nucleotide Polymo印hism，sNP)，根据ADP诱导的血小板 聚集抑制率ADP．IR％将患者分组：ADP．II蝴茎30％为HTPR组，30％为非HTPR 组。随访至少12个月，记录心血管终点事件。基础研究部分：50只雄性sD大 鼠随机分为空白组(BLA)、糖尿病组(DM)、氯吡格雷组(BLA+CLO)和糖 尿病+氯吡格雷组(DM+cL0)4组，普通饲料饲养8周，采用灌胃法给予氯吡 格雷，糖尿病模型采用STZ一次性注射法建立。流式细胞术检测CD62P水平和 胞质内钙离子浓度([Ca2+])，Elisa法检测同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)、 超敏C反应蛋白(Hi幽Sensitive C．Reactive Protein，hs．CRP)、超氧化物歧化酶 (Superoxide Dismutase，SOD)、丙二醛(Malonaldehyde，MDA)、血栓素A2 (Tllromboxalle A2，T)@2)、前列环素(Prostacyclin，PGl2)、及一氧化氮(Nitric 0xide，N0)等指标的水平，Realtime—PcR和westem-blot检测cYP450、P2Y12、 PKC基因和蛋白的表达。 结果：临床研究部分：①HTPR总发生率为1 5．74％，女性显著高于男性(24．29％ vs 13．01％，尸0．01)。⑦性别(女性)、糖尿病、HcY和hs．CRP与HTPR发生正 相关(OR-2．023，95％CI：1．146—3．571，仁0．015；0R-2．815，95％CI：1．737．4．56l， P=0．000； 0R=2．479， 95％CI： 1．092—5．629，P=0．030； 0R=8．476， 95％CI： 万方数据 解放军医学院博士学位论文1．588．45．240，P=0．012)。o基因多态性检测发现4个sNP阳·陆位点：rsl057910、 解放军医学院博士学位论文 1．588．45．240，P=0．012)。o基因多态性检测发现4个sNP阳·陆位点：rsl057910、 rs2242480、rs2246709和rs776746。④rsl057910与HTPR发生率呈正相关 (OR=2．90，95％CI：1．44—5．68，P=0．003)，rs2246709及rs776746与HTPR发生率 呈负相关(分别OR=o．69，95％cI：0．49．0．98，Jp=o．039：oR=o．66，95％cI：o．45．0．9