绿茶茶多糖与茶多酚对胰岛细胞的协同保护作用研究-水产品加工及贮藏工程专业毕业论文.docxVIP

polys学位论文完成日期： polys 学位论文完成日期： 指导教师签字： 答辩委员会成员签字：二童萝衄姆 。罄乏堑盛一 本人声明 本人声明 研究成果。据 他人已经发表 育机构的学位 献均已在论文 学位论文作者签名：互躺。签字日期．矽‘，年f月7日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公 众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 毛排≮ 导师签字： 签字日期：如‘／年f月1日 签字日期：w‘序 绿茶茶多糖与茶多酚对胰岛细胞的协同保护作用研究摘要 绿茶茶多糖与茶多酚对胰岛细胞的协同保护作用研究 摘要 近年来，随着社会发展和人们生活方式的改变，糖尿病发病率在全球范围 内呈上升趋势，严重威胁人类健康。目前主要采用降血糖药物和注射胰岛素治 疗，但会引发严重副作用且不能有效防治并发症，所以开发利用天然的抗糖尿病 药物或保健品显得尤为必要。研究证实，粗老绿茶能显著防治糖尿病及其并发症， 其主要功效成分为茶多酚和茶多糖，但目前粗老茶的开发力度远远不够，加强对 粗老茶资源的高值化开发利用已成为我国茶叶产业发展的必然趋势。 如今，茶多酚已广泛应用于医药、化工和食品等行业，而有关茶多糖的研究 正处于起步阶段。以往报道的多糖制备工艺存在诸多缺点，如有机溶剂消耗量大、 污染环境、多糖活性受到影响等，所以探索安全有效的茶多糖分离纯化技术成为 亟待解决的问题。此外，针对绿茶防治糖尿病的相关研究仅仅局限于在动物实验 水平上单独研究茶多酚或茶多糖对糖尿病的治疗效果，而细胞实验水平及二者相 互协同作用的研究鲜有文献报道。 本文首先探讨了粗老绿茶中茶多酚和茶多糖的综合提取分离工艺；然后利用 市售粗茶多糖为原料，将聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)、壳聚糖(CTS)树脂和层析 技术等用于茶多糖的分离纯化，制备出具有高生理活性的相对纯品绿茶多糖 (TPS)及其分级组分TPSI、TPS2，并对其进行结构分析；最后采用放射免疫 法、DCFH．DA荧光探针、JC．1检测及单细胞凝胶电泳(SCGE)等方法，观察TPS 和EGCG对链脲佐菌素(STZ)损伤M1N6细胞的协同保护作用，并初步探讨可能 机制。结果如下： A．茶叶综合提取研究中，通过单因素和正交实验确定茶多酚和茶多糖的最 佳热水浸提条件：料液比1：20、80℃、50 min，两次，在此基础上通过有机溶剂 综合萃取法制备粗茶多酚和茶多糖，得率分别为9．75％和5．83％。 B．茶多糖分离纯化工艺的研究中，首先确定最佳醇沉多糖条件为：乙醇浓 度80％、沉淀3 h、离心10 min，醇沉两次。进一步采用PVPP处理可达到脱除多 糖制品中多酚和蛋白的双重目的，二者去除率分别达N80．8％和82．7％。最佳条 件为：PVPP 8．0 g／L、温度30℃、时间30 min、处理两次：后续采用CTS树脂除 杂得至IJTPS，过Q．Sepharose FF分离得到分级组分TPSl和TPS2。 C．采用高效液相色谱、气相色谱、氨基酸自动分析仪、紫外光谱及红外光 C．采用高效液相色谱、气相色谱、氨基酸自动分析仪、紫外光谱及红外光 谱等方法对TPS、TPSI和TPS2进行结构分析，发现：(1)三者都是含有蛋白 质的酸性多糖糖缀合物。多糖部分主要由半乳糖、葡萄糖和阿拉伯糖组成，含有 少量鼠李糖、甘露糖和木糖；而蛋白组分中含有常见的15～16种氨基酸，以天冬 氨酸、谷氨酸、亮氨酸最多，肽链上含有丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸，而未检出羟 赖氨酸和羟脯氨酸。(2)主要区别在于：a．TPS的组成多糖分子量分布较广，而 TPSl和TPS2分别为12KDa和10 KDa的相对均一多糖；b．基本组成成分含量不 同。TPS、TPSI和TPS2的多糖含量分别为43．25％、82．48％和74．57％，糖醛酸 质量分数分别为23．36％、13．01％和45．75％，蛋白质分别为3．30％、2．59％和5．05％， 多酚类均未检出，TPS2中糖醛酸含量明显高于TPSI； D．通过体外细胞实验研究TPS和EGCG对MIN6细胞的协同保护作用，表 明：(1)TPS-500 ttg／mL、EGCG一10 gg／mL和TPS-50+EGCG-1．0 I．tg／mL对受损 MIN6细胞分泌胰岛素功能的保护干预作用显著(P0．05)， TPS-50+EGCG一1．01ttg／mL效果最佳(氏O．01)；(2)TP