实验6——可溶性蛋白质的测定.pptVIP

实验六：可溶性蛋白质的测定（考马斯亮蓝G-250法） 1．实验原理　　 考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素络合物在595nm波长下有最大光吸收。其吸光值与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。 2. 适用范围与特点 该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法（劳里法）还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0~1000μg/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 该法的不足是当蛋白质含量过高时，线性关系较差，重复性也较差，同时染料很容易结合到比色皿上，给实验结果造成一定误差。 3. 实验材料、仪器与试剂 材料：豆芽 仪器：可见分光光度计，分析天平，容量瓶，移液管，具塞刻度试管，研钵，漏斗，铁架台，玻璃棒。 试剂：考马斯亮蓝G-250，无水乙醇，磷酸，牛血清蛋白。 试剂配制： 考马斯亮蓝G-250试剂：称取0.1000g考马斯亮蓝G-250，溶于50mL95%乙醇中，加入85%磷酸100mL，用蒸馏水定容至1000mL。 标准蛋白质溶液（100μg/mL）：称取0.0100g牛血清蛋白（BSA），溶于100mL蒸馏水中。 4. 实验步骤 （1）样