实验五过氧化物同工酶PAGE分析.pptVIP

实 验 五 过氧化物同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）分析 （P98） 一、目的 掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术的原理和操作方法 掌握PAGE法分离过氧化物同工酶的原理和方法 二、原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） 过氧化物同工酶及活性染色 （一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）P20 （一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） （一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） （一）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE） 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺（Acr）和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺（Bis）在加速剂 N,N,N,N-四甲基乙二胺（TEMED）和催化剂过硫酸铵（AP）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis，简称PAGE) 反应过程 TEMED催化AP生成硫酸自由基 S2O82－ 2SO4·ˉ 硫酸自由基的氧原子激活Acr单体并形成单体长链： PAGE法分离蛋白质的三种效应 电荷效应：各种蛋白质分子所带电荷不同，在同一电场中泳动率不同； 分子筛效应；蛋白质分子大小和形状各不相同，在通过一定浓度（一定孔径）凝胶时受阻力各不相同，泳动率也不相同； 浓缩效应：凝胶为不连续系统（凝胶层、pH、电位梯度均不连续）