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洛铂对喉癌细胞株Hep-2作用的初步探讨-肿瘤学专业毕业论文.docx

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河北医科大学 河北医科大学 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。 本学位论文研究所获的研究成果,其知识产权归河北医科大学所有· 河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用.凡发表与学 位论文主要内容相关的论文,第一署名单位为河北医科大学,试验材 料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则, 承担相应的法律责任. 研究生签名蒋撕 导师签名:臻考瑚≮院领导签名:‘苡窒荔 邸年弓月谬日. 河北医科大学 研究生学位论文独创性声明 本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果,除了 文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人已经发表或撰 写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写, 文责自负· 研究生签名:梅≮诠 导师签名:京男儿 一·殍弓月功日 中文摘要洛铂对喉癌细胞株Hep-2作用的初步探讨 中文摘要 洛铂对喉癌细胞株Hep-2作用的初步探讨 摘 要 目的:喉癌是危害人类健康和生命的恶性肿瘤,手术及 放疗为其主要治疗手段,但手术后患者喉失去原有的发音功 能,很大程度影响喉癌病人的生活质量及生存率。近年来随 着化疗水平的提高,化疗在喉癌的综合治疗中越来越占有重 要的地位,比如喉癌的新辅助化疗,其目的在于缩小肿瘤、 使临床分期提前、与放疗或喉部分切除术结合尽可能保留喉 的发音功能。喉癌因位置隐蔽,发现时往往已到中晚期,晚 期喉癌或经手术后出现复发的患者再次手术较为困难,单纯 放疗只针对局部病灶,难以收到理想的效果,临床上即给予 化疗,以控制肿瘤的全身转移,缓解症状,延长生命。 铂类是头颈部化疗的基础用药,以顺铂(cDDP)为基 础的化疗在头颈部肿瘤治疗中研究较多,并取得了一定的疗 效,由于顺铂严重的肾毒性和消化道副作用限制了它在临床 的应用,因此开发高效低毒的铂类制剂一直是学者们研究的 方向。洛铂是第三代铂类衍生物,洛铂以其较轻的毒副作用、 与顺铂不完全交叉耐药以及较强的抗肿瘤活性,已初步显示 了其在肿瘤治疗中的重要作用。 本实验以喉癌细胞株Hep.2为模型,采用倒置显微镜、 MTT比色法、流式细胞技术检测洛铂对喉癌细胞的增殖、周 期阻滞、诱导细胞凋亡等作用,应用免疫细胞化学法检测凋 亡相关蛋白bcl.2的表达,初步探讨洛铂对喉癌细胞的增殖 抑制、细胞周期改变、诱导细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达等 中文摘要方面的作用,为洛铂在头颈部肿瘤化疗中的应用提供实验依 中文摘要 方面的作用,为洛铂在头颈部肿瘤化疗中的应用提供实验依 据。 方法:1以对数生长期的喉癌细胞进行实验,将实验分 组为:①空白对照组(培养液);②阴性对照组(细胞+培养 液);⑧实验组(细胞+不同浓度洛铂+培养液);将各组分别 培养24、48、72小时。 2倒置显微镜下观察细胞生长情况及细胞形态学改变。 3应用MTT比色法检测洛铂对喉癌细胞的增殖抑制情况。 4应用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率的改变。 5应用免疫细胞化学法(S.P法)检测bcl.2蛋白表达的变化。 6统计学处理:采用SPSSl3.0统计软件包进行统计学处理。 数据分析时先行正态性检验,符合正态分布计量资料用均数 ±标准差(i±s)表示。组间比较先进行方差齐性检验,符合方 差齐性后采用单因素方差分析的方法进行,如差异有显著 性,进一步LSD法进行两两比较。两样本均数的比较用t检 验,显著性水平以P0.05为有统计学意义。 结果:l相差显微镜下每日观察对照组和各实验组细胞 大小和形态的变化。阴性对照组Hep.2细胞为上皮样,贴壁 生长于培养基质,轮廓清晰,细胞间结构紧密,生长旺盛。 51amol/L洛铂作用48h后可见少量细胞体积增大、变圆,仍 贴壁生长。209mol/L时贴壁生长细胞逐渐减少,变圆细胞逐 渐增多,脱壁漂浮的小圆球细胞及细胞碎片逐渐增多,到 801xmol/L高浓度药物作用后贴壁生长细胞极少,出现成堆漂 浮的死亡细胞及细胞碎片 2洛铂对细胞增殖的影响:不同浓度洛铂在同一时间A值与 对照组比较, 51amol/L洛铂作用24小时与对照组无统计学 中文摘要意义,其余各组与对照组比较差异均有统计学差异(pO.05)。 中文摘要 意义,其余各组与对照组比较差异均有统计学差异(pO.05)。 同一浓度洛铂作用24、48、72小时比较差异均有统计学意 义(po.05)。洛铂能明显抑制喉癌细胞的增殖,抑制率随着 药物浓度的增加而增加,有剂量依赖关系;抑制率并随着药 物作用时间的延长而增加,有时间依赖关系。但是到达一定 抑制率(80%左右)后,再增加洛铂药物浓度,抑制率增加 并不明显,呈现平台效应。 3洛铂对细胞周期的影响:同一浓度洛铂作用24、48、72 小时S期及GgG。期与对照组比较差异均有统计学

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