绿色荧光蛋白示踪检测骨髓间充质干细胞移植在CIA大鼠体内的迁移、定植和分布-内科学专业毕业论文.docxVIP

2 结 果22 2.1 脏器免疫组化结果 22 2.2 关节组织免疫组化结果26 3 讨 论28 4 结 论30 参考文献31 综 述33 致 谢42 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果 43 个人简历44 山西医科大学硕士学位论文 山西医科大学硕士学位论文 I I 绿色荧光蛋白示踪检测骨髓间充质干细胞移植在CIA大鼠体内 的迁移、定植和分布 摘 要 目的： GFP 标记的 BM-MSCs 通过体外培养、扩增后移植到 CIA 大鼠体内，通过光学 成像联合免疫组化的方法检测其在 CIA 大鼠免疫器官以及关节部位的迁移、定植和 分布情况，探讨其修复损伤的可能机制。 方法： 1.对 GFP 标记的 MSCs 进行体外培养、扩增及鉴定。 2.将 II 型胶原与完全弗氏佐剂的混合制剂间隔 14 天两次免疫 Wistar 大鼠，从大鼠 症状（大体观、关节炎指数、后肢肿胀程度）、影像学、病理学方面进行评估，建立 CIA 大鼠模型。随机分为早期干预组（n=20）、晚期干预组（n=20），同时设置 CIA 早期对照组（n=12）、晚期对照组（n=12）和正常对照组（n=12）。 3.尾静脉途径移植 GFP-MSCs，小动物活体成像技术动态观察移植 MSCs 在大鼠 体内的迁移过程。 4.于 3、11、30 和 42 天将各组大鼠的脾脏、胸腺、淋巴结和关节组织作成病理切 片，通过免疫组化的方法检测移植细胞在免疫器官和炎症关节部位的迁移和分布。 结果: .（1）早、晚期干预组关节炎指数、关节肿胀程度较 CIA 对照组明显下降( P＜ 0. 05) ；(2) 早期干预组与晚期干预组比较，关节炎指数与关节肿胀程度降低，差异 有统计学意义( P＜0. 05)。 .小动物活体成像技术未能动态监测到 MSCs 移植在 CIA 大鼠体内的迁移过程， 动物自身荧光干扰明显。 II II 3.抗 GFP 免疫组化法在干预组大鼠免疫器官和关节部位成功检测到 GFP 阳性结 果，并可持续存在至少 42 天。 结论: 1.MSCs 经尾静脉途径移植后，可迁移至 CIA 大鼠脾脏、淋巴结和胸腺和关节炎 症部位，并可较长期（42 天）定植于该组织。 2.GFP 不适用活体示踪检测 MSCs 在大鼠免疫器官及关节部位的迁移。 3.MSCs 干预对 CIA 大鼠有效，早期干预疗效优于晚期干预。 关键词：胶原诱导关节炎；绿色荧光蛋白；骨髓间充质干细胞；移植 PAGE PAGE III Migration, colonization and distribution of bone marrow mesenchymal stem cells transplanted in CIA rats by green fluorescent protein tracing Abstract Objective: GFP-MSCs was transplanted in CIA rats after cultured in vitro.The migration, colonization and distribution of MSCs in immune organswas and joints were detected by optical imaging combined with immunohistochemical method.To study the mechanism of MSCs in repairing damage. Methods: MSCs labeled with GFP was cultured, amplified and identified in vitro. he mixture of II type collagen and complete Freunds adjuvant was injected into Wistar rats space at 14 days. The clinical symptoms (gross, arthritis index, swelling degree of hind legs), imaging and histopathology of CIA rats were evaluated.Randomly divided into five groups, including early intervention group (n=20), late intervention group (n=20), CIA early control group (n=12), late control group (n=12) and normal contro