强心苷对离体蛙心的作用实验报告.docx

强心苷对离体蛙心的作用实验报告 　　实验十、强心苷对离体蛙心的作用　　[实验目的]学习斯氏(Straub)离体蛙心灌流法，观察强心苷对离体蛙心收缩强度、频率和节律的影响以及强心苷和钙离子的协同作用。　　[实验材料]　　1、动物：蛙　　3、药品和试剂：任氏液、低钙任氏液、5%洋地黄溶液、1%氯化钙溶液　　[实验方法]　　1、取蛙1只，用探针破坏脑及脊髓，背位固定于蛙板上。先剪开胸部皮肤，再剪除胸部肌肉及胸骨，打开胸腔，剪破心包膜，暴露心脏。　　2、制备离体蛙心　　在主动脉分支处下穿一线，打好松结，备结扎套管之用。　　于左主动脉上剪一“V”形小口，插入盛有任氏液的蛙心套管，通过主动脉球转向左后方，同时用镊子轻提动脉球，向插管移动的反方向拉，即可使套管尖端顺利进入心室。见到套管内的液面随着心搏上下波动后，将松结扎紧并固定在套管的小钩上。用滴管吸去套管内血液，以防止血块堵塞套管。　　结扎右侧主动脉，剪断主动脉，持套管提起心脏，自静脉窦以下把其余血管一起结扎，分离周围组织，在结扎处下剪断血管，使心脏离体。并用任氏液连续换洗，至无血色，使插管内保留左右的任氏液。　　3、将蛙心套管固定于铁架台，用带有长线的蛙心夹在心舒期夹住心尖部，将长线连于张力换能器。　　4、打开电脑及BL-410系统。记录一段正常心脏搏动曲线后，依次换加下列药液。每加一种药液后，密切注意心脏收缩强度、心率、房室收缩的一致性等方面的变化。　　换入低钙任氏液。　　当心脏收缩显著减弱时，向套管内加入5%洋地黄溶液～。　　当作用明显时，再向套管内加入1%氯化钙溶液2～3滴(过量)。　　[报告要点]打印或复印心脏的收缩曲线，图上注明加药、换药、心率、房室收缩的一致性、心室体积变化等方面的说明。　　[讨论]在本实验中可以看到强心苷的哪几种药理作用？　　[注意事项]　　1、本实验以青蛙心脏为好。因蟾蜍皮下腺体有强心苷样物质，可降低对强心苷的敏感性。　　2、在整个实验过程中应保持套管内液面高度不变，以保证心脏固定的负荷。　　3、在实验过程中，基线的位置、放大倍数、描记速度应始终一致。　　4、在实验中以低钙任氏液灌注蛙心，使心脏的收缩减弱，可以提高心肌对强心甙的敏感性。　　蛙类离体心脏灌流　　一、【目的要求】　　1、学习离体蛙心灌流法。　　2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏活动的影响。　　二、【原理】将离体蛙心保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。　　三、【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。套管夹、0．65％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。　　四、【方法与步骤】　　1、斯氏蛙心插管法　　一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。稳定住套管后，轻轻提起备用线，将左、右主动脉连同插入的套管用双结扎紧(不得漏液)，再将结线固定在套管的小玻璃钩上，然后剪断结扎线上方的血管。轻轻提起套管和心脏，看清静脉窦的位置，于静脉窦下方剪断有牵连的组织，仅保留静脉窦与心脏的联系，使心脏离体(切勿损伤静脉窦)。用任氏液反复冲洗心室内余血，使套管内灌流液不再有残留血液。保持套管内液面高度一致(～2cm)，即可进行实验。　　将插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉(不可夹得过