沧州医学高等专科学校血液学检验教学课件：第四章 细胞化学染色.pptVIP

3. 非缺铁性贫血 如巨幼细胞贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血等骨髓铁正常或不同程度的增加。 但再生障碍性贫血不会出现环形铁粒幼细胞，可作为与MDS鉴别的参考。 4. 继发性贫血的部分患者细胞内铁可减少，但细胞外铁不减少。 【质量保证】 1．所用器材必须清洁，需要作去铁处理。即用清洁液浸泡24h，取出反复水洗后浸人95%酒精中24h，晾干，再用4mo1/L HCl浸泡24h，蒸馏水冲洗（蒸馏水应不含铁离子），晾干待用。 2．应用液必须新鲜配制。 3．作细胞外铁检查时，需用含骨髓小粒的涂片，观察时需极细心。 4．计算细胞内铁时仅计数中幼、晚幼红细胞，其他阶段细胞不计数在内。 5．应注意骨髓铁与污染铁之鉴别，前者见于骨髓小粒内、幼红细胞或巨噬细胞内，后者往往浮在骨髓小粒之上或散在细胞之外。 （3）巨核细胞和Sternberg细胞鉴别 巨核细胞PAS强阳性，Sternberg细胞为阴性或弱阳性。 （4）戈谢氏细胞强阳性，尼曼-皮克细胞阴性或弱阳性。 （5）淋巴肉瘤、霍奇金病等，淋巴细胞的糖原积分增高；一般的病毒感染，糖原积分在正常范围内。 【质量保证】 1，过碘酸溶液浸泡时间不宜过长，否则醛基进一步被氧化为梭基。 2．过碘酸和偏重亚硫酸钠易潮解，用后必须密封或放于干燥器内存。 3．配制雪夫液的器具需十分清洁干燥。雪夫液显红即失效 4．活性炭可以多加，其目的在于吸附红色。如品红不合格，多加活性炭红色亦不能被吸附掉。 5．放人雪夫液中染色时，涂片一定要完全干燥，若有水，则雪夫液即变红而失效。 6．染色时间和温度应相对恒定，一般37C 30min最好。 7．染色好的标本不能久置，8天后逐渐退色。因此应及时观察结果。 五、中性粒细胞碱性磷酸酶染色 偶氮偶联法（Kaplow法） 【原理】中性粒细胞胞浆中的碱性磷酸酶在pH 9.2~9.8缓冲液中，能水解磷酸萘酚钠，并释放出磷酸与萘酚。再以重氮盐与萘酚偶联成不溶性有色偶氮染料沉淀于胞浆中。 【结果】 坚牢蓝RR阳性为紫黑色颗粒， 坚牢紫酱GBC阳性为棕红色沉淀。 “一”阴性反应，胞浆中无阳性染色颗粒。 “＋”胞浆中含有少量颗粒或呈弥散浅红色（或弥散紫色）。 “2＋”胞浆中含有中等量颗粒或弥散受色。 “3＋”胞浆中有丰富的颗粒或弥散深色，胞核清晰。 “4＋”有极丰富的粗大颗粒，充满胞浆，或弥散深色，胞核不清晰。 中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP) 偶氮偶联法 NAP积分法 计数100个成熟中性粒细胞，按其反应强度分级，各级百分率与其级数乘积的总和，即为积分。 例如： NAP反应结果（%） （-） （+） （++） （+++） （++++） 20 40 20 15 5 积分=（0×20）+（2×20）+（3×15）+（4×5）=145 参考值：正常人血细胞碱性磷酸酶除成熟中性粒细胞（杆状核及分叶核）可见阳性外，其他血细胞均为阴性。 中性粒细胞NAP活性积分值一般为10～50分，但有时可高达162分。 【临床意义】 （1）生理变化： 新生儿NAP增高，成人较儿童减低，老人更低；激烈运动增高； 月经期经前增高，行经后降低，经后期恢复正常； 妊娠期2-3月轻度增高，以后逐渐增高，分娩时达到高峰，产后恢复正常。 （2）、病理变化 增高：严重化脓性感染、类白血病反应、AA、CML加速期、ALL、CLL、恶性淋巴瘤、癌转移、MM、真红、骨髓纤维化等。 减低：PNH、CML、恶性组织细胞病、MDS。 （3）疾病鉴别诊断 慢粒与类白的鉴别：CML减低，类白增高。 急性白血病的鉴别：AML减低，ALL增高。 PNH与AA鉴别：PNH减低，AA增高。 病原微生物的鉴别：病毒感染减低，细菌感染增高。 NAP (++++) CML-NAP(-) 六、酸性磷酸酶染色（ACP） 【原理】 血细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下，将基质中的磷酸萘酚AS-BI水解，释出萘酚AS-BI，再与重氮盐偶联，形成不溶性有色沉淀，定位于胞浆中。 2、结果 阳性反应为棕黑色颗粒沉淀， 定位与胞质中。 粒细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞呈阳性。 酸性磷酸酶(ACP) 偶氮偶联珐 3、临床意义 （1）白血病类型鉴别 多毛细胞白血病的多毛细胞ACP呈强阳性或中等度阳性，且不被L-酒石酸抑制；CLL和淋巴瘤ACP常呈弱阳性