第一代测序技术.ppt

测序技术;目录;第一代测序技术的发明人;第一代测序技术;;原理;这有四组试剂，第一组含有三种脱氧核苷酸，这一种双脱氧核苷酸;测序是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，并且在每个碱基后面进行荧光标记，产生以、、、结束的四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的胶上电泳进行检测，从而获得可见的碱基序列。 法测序的原理就是，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸()使之扩增，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸()使之终止。由于缺乏延伸所需要的‘基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在、、或处终止，终止点由反应中相应的双脱氧而定。; 每一种和的相对浓度可以调整，使反应得到一组长几个至千以上个，相差一个碱基一系列片断。它们具有共同的起始点，但终止在不同的的核苷酸上，可通过高分辨率变性凝胶电泳分离大小不同的片段，凝胶处理后可用光胶片放射自显影或非同位素标记进行检测。;;应用; 具有代表性的新一代测序仪;循环芯片测序法;;虽然这些新一代测序仪以及芯片的实际制作过程似乎都和传统的测序方法有很大的不同，而且各有特点，但实际上它们背后的原理和技术都是非常相似甚至是相同的（图）。新一代测序法首先也是将基因组随机切割成小片段分子，然后在体外给这些小片段分子的末端连接上接头制成文库，也可以使用配对标签（ ）制成跨步文库（ ）。随后可以通过原位（ ，小词典）、微乳液（ ）或桥式（ ）（图）等方法获得测序模板。;上述方法有一个共同点，那就是任何一个小片段分子的扩增产物都是在空间上聚集的：原位法和桥式法中所有的产物都集中在平板的某处，在微乳液法（ ）中所有的产物都集中在微珠的表面。真正的测序反应本身和传统测序法一样，是由重复的聚合酶促反应和最后的荧光读取分析反应组成（图）。本文讨论的所有测序仪都是使用合成测序法（ ），即通过聚合酶或连接酶不断地延伸引物获得模板序列，最后对每一轮反应的结果进行荧光图像采集、分析，获得序列结果。;以测序仪说明二代测序的一般流程; 测序; 测序原理 ; 的测序原理;???序;测序原理;激光扫描看荧光 重复步骤，得到延长个碱基的长度 洗掉第一次的测序延长链 错位加入荧光探针，重复的过程 把错位的荧光信号排列组合，得到序列;应用;;高通量测序;高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变，一次对几十万到几百万条分子进行序列测定，因此在有些文献中称其为下一代测序技术( )足见其划时代的改变，同时高通量测序使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序()。;实验过程;技术应用;意义;;第三代测序技术;原理;第三代测序技术解决关键技术;第三代测序技术特点;;第三代测序技术的应用;突变鉴定（检测）：单分子测序的分辨率具有不可比拟的优势，而且没有扩增步骤，就没有扩增引入的碱基错误，该优势使其在特定序列的检测，稀有突变及其频率测定中大显身手。例如在医学研究中，对于基因是否是急性髓细胞白血病（）的有效治疗靶标一直存在质疑。研究人员用单分子测序分析耐药性患者基因，意外发现耐药性与基因下游出现的稀有新突变有关，重新证明了基因是这种最常见白血病—急性髓细胞白血病（）的有效治疗靶标，打破了一直以来对于这一基因靶标的疑惑。凭借平均的读长，获得了更多基因下游的宝贵信息，而基于单核酸分子的测序能够检测到低频率（低至）罕见突变，正是这项成果的关键所在。;thank you