1.组织病理学制片技术.pptx

Notice1.上课请关手机（或调成振动，接电话到室外）。2. 选修课自愿选择，试听一次，下次课班长提交选修课学生名单(包括email)。3. 学分问题⑴ 平时表现 如：纪律、问答、作业。⑵ 结课测验?⑶ 对本课程的意见和建议；组织病理学制片技术Histopathologic technology生命科学研究中心 邢立强emxlq@163.com目的和要求Aims and Requirements了解生物组织的特点及取材的注意事项；熟悉切片的原理、一般要求及注意事项；掌握石蜡切片制作技术；病理学常用的观察手段The common survey means in pathology1、大体标本观察：主要用肉眼、量尺及各种衡器等辅助工具，对所检标本的大小、形状、色泽、重量、表面及切面、病灶特点进行观察及测量。2、组织切片的观察：取正常或病变组织进行切片、染色(HE染色最常用)在显微镜下进行观察。病理学标本的种类Types of pathologic samples 1、活体组织检查(Biopsy)：简称活检，从患者活体局部切取、钳咬、细针吸取和摘取等手术方法获取病变组织进行病理检查。2、脱落细胞学检查(Exfoliative cytological exam)：对患者痰液、胸腹水、尿液以及阴道刮片、食管拉网、纤维胃/支气管镜所取得的材料进行涂片，以检查脱落细胞，是早期发现和诊断肿瘤的好方法。3、尸体解剖(Autopsy)：通过尸检可查出病因和病变，及时发现和确诊某些传染病、新发现的疾病，积累经验，提高诊疗水平。4、动物实验(Animal experiment)：根据研究需要，在动物身上复制人类某些疾病的模型、进行观察研究，了解疾病的病因、发病机制及药物疗效等。5、组织/细胞培养(Tissue and Cell culture)：将某种组织或单细胞在适宜的培养基中体外培养，来研究各种病因作用下组织、细胞的病理变化及治疗效果。病理技术的应用Application of pathologic technique帮助临床查明死因(尸检);手术后病变标本，明确诊断(临床活检);为教学、科研提供资料;第一节 组织处理Tissue processing取材(Sample collection)→固定(Fixation)→脱水(Dehydration)→透明(Transparentizing) →浸蜡(Paraffin soaking)→包埋(Embedding)一、取材(Samples collection) 1. 人为因素 2. 标本大小 3. 取材时间 4. 包埋方向 5. 边缘标记 6. 小标本的处理方法 7. 特殊情况取材 8. 取材数量 9. 清除多余成分 10. 重复取材 11. 核对取材12. 剩余组织存放 二、固定(Fixation)固定就是用物理或化学方法，阻止组织细胞离体或培养细胞脱离生存环境后发生形态学变化。(一)固定的目的1. 迅速阻断组织细胞离体后的自溶性变化，防止腐败，尽量保持组织细胞生活状态下的形态结构。2. 使细胞内的蛋白质、脂肪、糖、酶等成分转变成不溶性物质，并保持原有的空间位置。3. 固定剂有硬化作用,增加组织的硬度,便于制片。4. 组织中的各种物质经固定后产生对染料的亲和力，利于染色和观察。（二）常用的固定方法1. 浸泡固定法 2. 灌注固定法 3. 细胞涂片的固定方法4. 微波固定法5. 蒸气固定法（三）常用的固定液1. 单纯固定液(1) 甲醛(formaldehyde)(2) 酒精(alcohol)(3) 苦味酸(picric acid) (4) 丙酮(acetone)(5) 醋酸(acetic acid) 2. 混合固定液(1) Bouin液 ：用于结缔组织及脂肪染色；(2) Zenker液：常用于三色染色； (3) 4%多聚甲醛-磷酸二氢钠-氢氧化钠液； （四）固定后的处理1. 一般固定液(甲醛等)固定组织后，用流水冲洗以清除组 织内的固定液终止固定。2. 含有乙醇、乙酸及苦味酸的固定液，组织固定后不需要或不能用水冲洗。3. 含有铬酸、重铬酸钾和锇酸的固定液，组织固定后应充分水洗，一般为12~24h。4. 用含汞的固定液固定组织后，要进行脱汞处理，可在组织脱水前或切片染色前进行，一般多在染色前脱汞。其方法为切片脱蜡入水后，入0.5%碘乙醇5~10min，水洗后再入3%~5%硫代硫酸钠或95%乙醇1~2min，再充分水洗，蒸馏水洗后进行染色。（五）固定时的注意事项1. 标本 应新鲜并及时取材，快速放入固定液中。特殊标本应单独固定和存放。2. 固定液的用量 一般固定液用量为组织块体积的10~20倍，贵重的固定液不少于3~5倍。避免组织紧贴容器底部，影响固定效果。对