哺乳动物细胞中所得多肽复合酶CAD催化反应产物的HPLC分析.PDF

2001年第59卷 化学学报 Ⅷ ．59．2001 第5期．788—792 ACTA CHIMICA SINICA No 5．788—792 哺乳动物细胞中所得多肽复合酶CAD催化反应产物的HPLC分析 王来来’ 胡霄雪 辛嘉英 崔俊儒 李树本 (中国科学院兰州化学物理研究所 羰基合成与选择国家重点实验室 兰州 73ooo0) 朱利民 (英国北伦敦大学生物和应用科学系 伦敦) 摘要 本研究报道了以150脚1x4．6脚1I．D．Zorbax为色谱柱，10mmol·L一 K~P~和500mmol·LI1KH2P04水溶液H O 为洗脱渡，梯度程序为0—5mln( =l，体积分数)10 mmol·L P0 溶掖，5—50min由( =1)10 mmol·LI1 KH2P~溶液转换到( ：1)500 rO rr时d·L一 KH2P~溶液时，高效液相色谱分离了哺乳动物细胞中所得多肽复合酶O CAD催化反应混合物三磷酸腺苷(AVP)、二磷酸腺苷(ADP)和二氢乳清酸(DHO)，确定了ATP，ADP和DHO的出峰顺 序，制作了工作曲线，确定了催化反应混合物中ATP，ADP和DHO的相应浓度 关键词 三磷酸腺苷，二磷酸腺苷，二氢乳清酸，梯度分离，高效液相色谱 IIPLC Separation ofthe Reaction Mixture in Mammalian Cell Catalyzed by the Multienzyme WANG Lai—Lai HUXmo—Xue XIN Jia-Y CUI Jun—Ru LI Shu—Ben (State研 L 柳 ， ‰ and Sdem~ n， Ⅱ ∞ f脚 ， TheCh／rse~ of rm， ，730000) Z}IUⅡ一Min (seh 毗) 11and却 Sc／ences， 时D， I ，￡ r m) Abs嘣 The product oftheflintt ∞ steps ofde noYo pathway ofpyr~dinebiosynthesisinmammalian celle catalyzed by c町kur-0yl ph嗍pl synthetase—asparate tmnBc町kur。0yl且se—dihyroorotase are adenosine 出ph暗I虹止e(AJ)P)and dihydroomtate(DHO)．And one of reactant is adenosine triphosphate(ATP)．A HPLC methodfor．~paration ofADP，ATP and DHO was developed．A ~lZ box column(150 m X 4．6 mm I．D ) was used．The mobile pl1ase we 0．01 mol’L—potassium dihydrogen