棉铃虫氨肽酶N毒素结合区片段对Cry1Ac增效的研究-农药学专业毕业论文.docx

m1I m1I l l II II II Iil l III 1Ill Y1 88 1 525 DISSERTATIoN Th q,ynergisticsynergistic analysls 0I ／-／eltcoverpa aminopeptidase N toxin--binding region fragment to CrylAc toxicity Ms．Candidate：Zhang Yongdong Supervisor：Prof．He Lin Co—Supervisor：Prof．Wu Kongming Major：Pesticide Science Field：Pesticide Toxicology and Scientific Application Southwest University College of Plant Protection May，2011 独创性声明学位论文题目：捣耸虫氢丛酶盟耋苤结金匡丘壁过g!Y!△g擅錾的瑟究 独创性声明 学位论文题目：捣耸虫氢丛酶盟耋苤结金匡丘壁过g!Y!△g擅錾的瑟究 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加了 特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁 在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者：翮4专身、 签字日期：秽帅 年 ∥月多日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院(筹)可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密， 口保密期限至 年 月止)。 学位论文作者签名：勿刁∥街、导师签名： 伺木梃 签字日期：0卅，年莎月多日 签字日期：加lf年多月6日 目录目录 目录 目录 摘要 ．．I Abstract ．III 第一章绪论 1 1．1 j；I言 1 1．2 Bt毒素及其作用机理 二 。2 1．2．1 Bt毒素简介 2 1．2．2 Bt毒素作用机理 ．5 I．3 Bt毒素受体的研究 6 1．3．1钙粘蛋白 6 1．3．2氨肽酶N ．．． ．8 1．3．3碱性磷酸酯酶 8 1．4 Bt毒素的抗性机制 9 1．4．1蛋白酶下调及缺失 ‰ 9 1．4．2免疫反应增强 ．．1 0 1．4．3结合位点改变 。10 1．4．4受体调控的抗性 。10 1．5 Bt抗性治理的策略 ．1l 1．5．1“高剂量庇护所”策略 ．11 1．5．2新毒素的开发利用 一1 1 1．5．3毒素基因叠加策略 ： 12 1．5．4毒素改造 。12 1．5．5增效蛋白的应用 12 1．6本研究的目的和意义 ．15 第二章氨肽酶N与CrylAc结合区片段原核表达及纯化 17 2．1材料与方法 一17 2．1．1供试昆虫 ．．1 7 2．1．3仪器设备 ．j ．19 2．1．4技术路线 ．．20 2．1．5棉铃虫总RNA提取 20 2．1．6 eDNA合后宛 ．2 l 2．1．7引物设计 21 2．1．8 PCR扩增 2 l 2．1．9产物回收及转化克隆载体 ．．22 2．1．10双酶切及转化表达载体 24 2．1．1l重组表达 25 2．1．12 SDS．PAGE电泳分析 ．26 2．1．1 3 Western blot检测 ．27 2．1．14表达片段纯化 28 2．2结果与分析 ．28 2．2．1基冈克隆 ．．． 28 2．2．2原核表达及纯化 一30 两南大学硕士学付论文2．2．3 两南大学硕士学付论文 2．2．3 Western blot检测 3 1 2．3结论与讨论 ．32 第三章氨肽酶N结合区片段的生测分析 ．．35 3．1材料和方法 ．．36 3．1．1供试昆虫 36 3．1．3仪器设备 ．．36 3．1．4蛋白表达纯化 。36 3．1．5蛋白透析及浓缩 。36 3．1．6蛋白定量 。 37 3．1．7生物测定 38 3．2结果与分析 ．38 3．2．1 APNltb蛋白透析定量 ．38 3．2．2生测结果分析 39 。3．3结论与讨论 40 第四章氨肽酶N结合区缺失片段的生测分析 j 4l 4．1材料与方法 ．4l 4．1．1供试昆虫 。41 4．1．2所用试剂 一4l 4．1．3仪器设备 ： ．．41 4．1．4蛋白表达 。41 。 4．1．5 SDS．PAGE电泳分析 ．j ： ．4l 4．1．6 Western blot检测 =． ．42 4．1．7蛋白纯化 。42 4