肿瘤细胞中表达的GFP蛋白的荧光漂白特性的研究.pdf

第24 卷 ,第12期 　 　　　　　　　　　　　光 谱 学 与 光 谱 分 析 Vol24 ,No 12 ,p 2 0 0 4 年 1 2 月 　　　　　　　　　　　 　Spectroscopy and Spectral Analysis December , 2004 　 肿瘤细胞中表达的 GFP 蛋白的荧光漂白特性的研究 金 　鹰 , 邢 　达 华南师范大学 , 激光生命科学省重点实验室 , 广东 广州　510631 摘 　要 　GFP 作为生物源性荧光探针具有其他荧光标记物所无法比拟的优势 , 目前已广泛应用于生物学研 ( ) 究的各个领域。利用常规转染方法将带有 EGFP 基因的质粒载体导入人肺腺癌肿瘤细胞 ASTCa1 , 并得 到 GFP 稳定表达的细胞株。研究中发现 , 肿瘤细胞中表达的 GFP 长时间暴露于强激发光中会发生非常强列 ( 的荧光漂白作用 , 并且这种漂白作用是不可恢复的。对不同强度的激发光 饱和光源、阻断片 ND4/ ND8/ ND16) 对 GFP 的漂白作用进行了研究 , 并对冷冻保存样品的光漂白作用进行了初步的探讨。 ( ) 主题词 　绿色荧光蛋白 GFP ; 人肺腺癌细胞 ; 光漂白 中图分类号:O6573 　　文献标识码 :A 　　　文章编号 (2004) 　　随着对基因的表达调控、蛋白质在活细胞自然状态下的 验中采用突变型 EGFP , 克服了紫外激发的强漂白和光破坏 变化等重要问题研究的深入 , 迫切需要一种操作简便、不用 作用 , 并得到高效、稳定表达的肿瘤细胞株 , 解决了自发荧 加外源底物 , 就能在活细胞中检测的分子探针 , 来自水母 光背景对检测的影响。 ( Aequorea V ictoria) ( 的绿色荧光蛋白 Green Fluorescent Pro 1 　材料和方法 ) tein , GFP 及其突变体能在多种细胞中表达 , 可以作为一种 独特的分子探针 , 用于追踪研究活细胞及其细胞器内所发生 11 　质粒扩增及纯化 [ 1 ] ( ) 的动力学过程 , GFP 的发现给这些应用带来了方法学上的 质粒表达载体 p EGFPC1 购自 Clontech 公司 , 宿主菌 革命。 (DH5α) 购自德国公司 , 按常规方法[ 4 ] 制备感受态细胞并进 虽然 GFP 在分子生物的众多研究领域有着广泛的应用 , 行细菌转化。质粒纯化试剂盒购自 Life