液态发酵法生产云芝胞内糖肽.pdfVIP

维普资讯 叁 塑 液态发酵法生产云芝胞内糖肽 余晓斌 ， 缪 静 胡卫珍 ， 陈 坤 濮文林 1(江南大学生物工程学院，无锡，214036) 2(江南大学工业生物技术教育部重点实验室，无锡，214036) 3(烟台师范学院生命科学学院，烟台，264025) 4(南京老山药业股份有限公司 南京，211811) 摘 要 通过筛选比较6株云芝菌种，获得液态发酵生产云芝糖肽较佳菌株CV-S和CV-H，经优 化摇瓶发酵，将菌株CV-S放大至30L罐发酵，28*(2发酵4d，菌丝体干重达24．9gL／，菌丝体破碎 后，超滤浓缩，醇沉干燥后，云芝胞 内糖肽产率达2．23g ，糖肽总糖为55．58％，肽 33．53％，经 HPLC检测其分子质量高于 10ku的有2个组分，分别为742．2和25．2ku，所提取的产品，其出峰 时间与标准品基本一致，总糖、单糖、肽含量符合国家药品标准wS_IxG一021—2002的要求。 关键词 云芝，云芝糖肽，液体发酵 云芝胞内糖肽系自担子菌纲多孔菌科云芝 芝糖肽标准品比较，并检测其总糖、还原糖、肽 属真菌的菌丝体中提取的结合蛋白多糖，具有 含量等指标。 广泛的药理作用，特别对机体的免疫功能具有 1 材料与方法 调节和增强作用，是一种有效的免疫增强药，已 成为治疗免疫功能低下者的药物。云芝胞内糖 1．1 菌 种 肽可预防和治疗慢性乙型肝炎、肝硬化等类肝 云芝菌种 6株，分别编号 CV—B、CV—D、 病，可预防和治疗多种肿瘤疾病如肝癌、乳腺 CV—H、CV_J、CV—L、CV—S，由本研究室从全国 癌、胃癌、食道癌、大肠癌、头颈部癌、妇癌等类 各地收集、分离并保藏。 恶性肿瘤，可降低放、化疗毒副反应，可作为治 1．2 培养基 疗癌症的辅助药品。此外云芝糖肽还具有镇 种子培养基：每升培养基含20g葡萄糖，3 痛、镇静、降血糖、抗乙肝病毒、以及提高抗氧化 g蛋白胨，5g麸皮及无机盐等。 能力，清除脂质过氧化物 (LPO)作用 ．2J。云 发酵培养基：每升培养基含 30g葡萄糖， 芝胞内糖肽已作为防治癌症的药物，因其疗效 20g豆饼粉，15g玉米粉，3g蛋白胨，5g麸皮及 好、无毒性而受到临床医生的青睐。 无机盐等。 有关云芝液态发酵有一些文献报道 ．8J， 121℃灭菌25min，冷却，接种，28℃，150r／ 但由于云芝糖肽是一个多组分复杂体系，糖肽 min，摇瓶发酵5d。 的理化性质、生理活性与分子质量和肽含量有 1．3 30L发酵罐的发酵条件 很大关系，如何通过液体发酵获得大量云芝菌 30L全 自动不锈钢发酵罐，pH，溶氧 D0 丝体，提取得到含有较高有效成分的产品，特别 探头为梅特勒公司产品，在线 自动检测，由无锡 是要符合国家药品标准WS--XG-021—2002要 三海生化工程有限公司制造。接种量 10％、搅 求，无疑是一个十分重要而关键的研究内容，目 拌转速 150～200r／min、通风0．8v／v／m、温度 前尚未见文献报道。文中主要通过菌种筛选， 26～28℃、装液量22L、罐压0．5kg／em2。 获得适合的菌株 CV—S、CV—H，经培养基优化， 1．4 云芝胞内糖肽的提取 将CV—S扩大至30L罐发酵液体发酵，提取获 1．4．1 摇瓶培养的胞 内糖肽的提取 得云芝胞内糖肽，通过高效液相色谱检测，与云 过滤发酵液获得菌丝体，洗涤2次，用组织 第一作者：博士，副教授。 收稿时间：2004—09—07，改回时间：2004—10—26