鳗弧菌疫苗对牙鲆和鲈鱼免疫效果研究-海洋生物专业毕业论文.docxVIP

墼墼笪堡堇翌蚕丝翌竺鱼丝堡塑墨业塑 墼墼笪堡堇翌蚕丝翌竺鱼丝堡塑墨业塑 一—— 摘要 对于目前频繁暴发的细菌性疾病，化学疗法有很多弊端，相比来说疫苗接种 对养殖环境和人类健康是安全的，因此被认为是防治细菌性疾病的最重要的方法 之一。目前国内外已有很多学者对接种疫苗进行水生生物疾病的免疫防治方法进 行了研究和探索，取得了一定成效：在我国，草鱼出血病细胞培养灭活疫苗及嗜 水气单胞菌疫苗的研制，来控制淡水鱼类细菌性疾病，也已取得一定进展；而海 水鱼类细菌性疾病疫苗的研究工作则刚刚起步，这方面的成果还很少，海水鱼疫 苗的研究和推广应用还需大量的工作。本研究针对海水鱼类频繁发生的弧菌病， 以主要病原鳗弧菌疫苗为研究对象．主要进行了鳗弧菌的优化培养和生长动态研 究、鳗弧菌疫苗的灭活条件研究、牙鲆和鲈鱼对鳗弧菌疫苗的免疫应答的研究， 为鳗弧菌疫苗的推广和应用奠定基础。 为了在规模化生产中提高鳗弧菌的培养效率，首先进行了鳗弧菌的优化培养 和生长动态研究，测定了不同温度、盐度、培养基初始pH、无机盐及培养基成分 配比对鳗弧菌生长的影响，确定了最佳的培养条件：为建立鳗弧菌疫苗的工厂化 生产工艺，还研究了疫苗的福尔马林灭活和热灭活条件：这些参数的确定为菌苗 的大规模生产提供理论依掘。 为评价疫苗的免疫效果，从而为鳗弧菌疫苗的推广和应用提供理论根据，还 研究了牙鲆和鲈鱼对鳗弧菌疫苗的免疫应答。 对疫苗的免疫效果的评价主要从受免鱼非特异性免疫因子活性、疫苗诱导的 特异性的抗体效价的水平、对人工攻毒的免疫保护率和疫苗对受免鱼生长状况的 影响几个方面进行评价。由于目前有关疫苗的非特异性免疫方面的研究还很欠缺， 本试验参照免疫增强剂或免疫刺激物研究中非特异往免疫因子检测的方法，测定 了鳗弧菌疫苗对牙鲆和鲈鱼的非特异性免疫因子活力的影响，主要从杀菌活力、 吞噬活力、溶菌活力、抗菌活力、超氧化物歧化酶活力、酚氧化酶活力和血清蛋 n浓度方i『ii_t评价疫苗的功效。为了从特异性免疫方面评价疫苗的免疫效果，还 利J{j自制的抗胍清采用ELISA技术检测了疫苗诱导翰特异性的抗体水平。 爿：鲆试验结果表明，该鳗弧菌疫苗两次腹腔注射接利叼：鲆，能够提高受免鱼 Jl：特异性免疫J矧。r的活性。疫茁的接}巾对斑清杀菌活力、溶落活力和斑细胞吞噬 活力有较大黪I帆，特别是对血清杀菌活力的影11，4最明照，建议对疫苗的非特异性 免疫影蚋研究Jfll以J仇清杀菌活力、溶菌活力和血细胞吞噬活力为主要评价指标； 4 鳗弧菌疫苗对牙鲆和鲈鱼免疫递墨咿堕试验还表明疫苗诱导的抗体效价明显升高，各免疫组鱼血清抗体效价的虽高值分 鳗弧菌疫苗对牙鲆和鲈鱼免疫递墨咿堕 试验还表明疫苗诱导的抗体效价明显升高，各免疫组鱼血清抗体效价的虽高值分 别达l：512(组I)、l：2048(组2)和l：1024(组3)，并对鳗弧菌攻毒可获得较高 的免疫保护率，分别达81 25％(组1)、87．50％(组2)和93．75％(组3)；但试 验发现受免牙鲆对鳗弧菌攻毒的免疫保护率与血清抗体效价并不完全相关；而且 发现对副溶血弧菌攻毒也可获得一定的交叉免疫保护，免疫保护率分别为46 15％ (组1)、53．85％(组2)和53．85％(组3)，这也证明了鳗弧菌和副溶血弧菌存在 共同的细胞表面抗原；另外，试验还表明添加佐剂虽然可以提高免疫应答水平， 但佐剂会产生很多副作用，造成内脏器官粘连、影响鱼的生长、摄食等；而且， 添加佐剂、适当增加疫苗的接种量或加强免疫，都可提高机体免疫应答水平，增 强机体对疾病的防御能力。 另外，鲈鱼免疫试验表明，通过浸浴接种鳗弧菌疫苗，并利用浸浴和注射两 种接种途径加强免疫，均在一定程度上提高了非特异性免疫因子的活力，并诱导 了特异性抗体的产生，血清凝集抗体效价最高值分别达1：128(浸浴+浸浴)和 l：256(浸浴+注射)，而且对攻毒均具有一定的免疫保护力，分别为38．89％(浸 浴+浸浴)和61．11％(浸浴+注射)；试验还表明，采用注射接种加强免疫较浸 浴接种效果更好，非特异性免疫因子的活性、抗体效价、免疫保护率相对都较高， 这说明接种途径会影响疫苗的免疫效果。 关键词： 鳗弧菌 疫苗 免疫应答 免疫保护率(RPS) 塑墨堕壅堇盟至墅塑笙鱼鱼壅墼墨业塑——Immunological 塑墨堕壅堇盟至墅塑笙鱼鱼壅墼墨业塑—— Immunological efficacy induced byⅣanguillarum vaccines on flounder(Paralichthys olivaceus) and perch(Lateolabraxjanopicus) Abstract At present time，vibriosis is a serious problem for