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微生物生化鉴定试剂盒 Rap·E-12—肠杆菌科 使 用 说 明 【原理】： Rap·E-12试验条是由12个含干粉状培养基的小孔所组成。这些测定的接种使用细菌悬浮液进行的。培养时，代谢作用产生了颜色变化，这些变化可以是自然发生的，也有的是由于加入试剂后表现出来的。经过35-37℃下培养18-24小时后，根据解释读反应，鉴定结果可以参考鉴定表或分析图谱索引得到。 【试剂盒组成】： 10或20个Rap·E-12的试验条 10或20张结果报告单 一份Rap·E-12的说明书及编码手册 【试剂】： PHE/TDA测定氨酸色氨酸脱氨酶 NO3测定硝酸盐还原 IND测定吲哚 OX测定氧化酶 【普通实验室条件】： 35-37℃培养箱、冰箱、酒精灯、记号笔、滴管或无菌加样枪头、安瓿管架、鉴定软件或编码手册。 【储存】： Rap·E-12试验条在有效期内应储存于2-8℃，有效日期标在包装上。 Rap·E-12试条是储存于铝袋中，铝袋开封后，应尽快使用。 OX和IND试剂对光高度敏感，如不在使用时应储存于冰柜内，不可将试剂留在工作台上。 【试剂的成分】： 检测氨酸色氨酸脱氨酶的PHE/TDA试剂 FeCL3 3.4g，蒸馏水100ml。 检测吲哚的试剂 正丁醇30ml，DMABA 2.0g，HCL 10ml。 检测亚硝酸盐的NO3I 对氨基苯磺酸 0.8g，乙酸 30ml，蒸馏水70ml。 NO3II N-N-二甲基-α-萘胺0.6g，乙酸30ml，蒸馏水 70ml。 检测氧化酶的OX试剂(纸片) 四甲基-对苯二胺1g，异戊醇100ml。 【操作说明】： 1、取出试验板条，平衡于室温。 2、OX氧化酶测定：将一滴水放在纸片上，用木棒或玻璃棒将一个菌落擦于纸片上，或用OX滤纸条从分离物平板上粘细 菌。如在1-2分钟内出现紫色是代表阳性反应。此结果可记录在记录卡的第11号试验结果内。 3、用干净的小试管取无菌蒸馏水2～3ml，挑取24小时培养后的目的菌加入无菌蒸馏水中，制成菌悬液，使其浊度相当于1-2号麦氏管。 4、制好的菌悬液按每孔100ul，加入试验板条中。其中A组④、⑤孔，B组的②、⑤孔需加3滴液体石蜡覆盖。 注意： a、Rap·E-12只用于非苛养的G-菌，Rap·E-12的数据库不包括需要高营养要求和需要专门处理的苛养菌。这些苛养菌必须以其它方式排除其在标本存在。 b、大部分弧菌种都是嗜高盐的，将怀疑弧菌的菌落加进0.85%的NaCL溶液。 Rap·E-12试条生化反应孔排列如下： ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE PHE/TDA IND O NO3 注：（O）氨基酸对照不计分。例如：7504肺炎克雷伯氏菌 ONPG GLU ARA LDC ODC CIT H2S URE PHE IND OX NO3 + + + + - + - - - - - + 7 5 0 4 5、读试验条结果： ａ、37℃培养18-24小时，根据解释表读结果。 ｂ、在报告单上记录自然发生的结果。 ｃ、需要加入试剂后出现结果的测定。 -PHE/TDA测定：加1滴PHE/TDA试剂，绿色/棕色出现表示阳性反映，记录于报告单上。 -IND测定：加1滴IND试剂，反应立即发生，在整个杯中出现粉色，表示阳性结果，记录于报告单上。 -NO3测定：各加1滴NO3I、II液于硝酸盐管内，等2-3分钟，红色出现表示阳性反应，记录于报告单上。 注意：硝酸盐还原反应及产生吲哚试验必须在最后进行，因为这些反应会产生气体，影响对其它试验结果的判读。因此，在加入试剂后，不应将培养盒的盖盖上。 6、鉴定 将记录在报告单上的结果与鉴定表的结果相比较。每3个测定归一群，并以1、2和4的数目标出。在每群中，以阳性反应的相应数字相加得到编码，利用细菌编码表查询菌名。 7、后处理 使用后，所有的安瓿管、试验条和培养盒在处理以前，都必须高压