聚乙二醇化Exendin4类似物受体亲和力测定方法.pdf

学 报 ２２２ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１６，４７（２）：２２２－２２７ 聚乙二醇化Ｅｘｅｎｄｉｎ４类似物受体亲和力 测定方法的建立 郭林峰，胡晓静，印　蕾，田　縥，姚文兵 （中国药科大学生命科学与技术学院，南京２１０００９） ＋ 摘　要　基于荧光素酶报告基因法和本实验室前期构建的ＣＨＯＧＬＰ１ＲＣＲＥＬｕｃ检测模型细胞株，建立并优化了长效降 糖多肽———聚乙二醇化Ｅｘｅｎｄｉｎ４类似物ＰＥ与ＧＬＰ１受体的亲和力测定方法，并对其进行了方法学验证。结果表明，当药 －３ ３ 物作用４ｈ，化学发光底物作用１５ｍｉｎ，检测药物在５７×１０ ～１５×１０ｎｍｏｌ／Ｌ浓度区间内时，该检测方法的专属性和耐 用性良好、准确度和精密度较高，符合《生物制品质量控制分析方法验证技术一般原则》的相关要求。本研究为该类ＧＬＰ１ 受体激动剂药物的快速评价与筛选奠定了基础。 关键词　Ｅｘｅｎｄｉｎ４；聚乙二醇化；受体亲和力测定；荧光素酶报告基因法 中图分类号　Ｑ５０３；Ｒ３２９６　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１６）０２－０２２２－０６ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ 引用本文　郭林峰，胡晓静，印蕾，等．聚乙二醇化Ｅｘｅｎｄｉｎ４类似物受体亲和力测定方法的建立［Ｊ］．中国药科大学学报，２０１６，４７（２）：２２２ －２２７ Ｃｉｔｅｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｓ：ＧＵＯＬｉｎｆｅｎｇ，ＨＵＸｉａｏｊｉｎｇ，ＹＩＮＬｅｉ，ｅｔａｌ．Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｓｓａｙｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｒｅｃｅｐｔｏｒｂｉｎｄｉｎｇａｆｆｉｎｉｔｙｏｆａ ＰＥＧｙｌａｔｅｄＥｘｅｎｄｉｎ４ａｎａｌｏｇｕｅ［Ｊ］．ＪＣｈｉｎａＰｈａｒｍＵｎｉｖ，２０１６，４７（２）：２２２－２２７ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｓｓａｙｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｒｅｃｅｐｔｏｒｂｉｎｄｉｎｇａｆｆｉｎｉｔｙ ｏｆａＰＥＧｙｌａｔｅｄＥｘｅｎｄｉｎ４ａｎａｌｏｇｕｅ  ＧＵＯＬｉｎｆｅｎｇ牞ＨＵＸｉａｏｊｉｎｇ牞ＹＩＮＬｅｉ牞ＴＩＡＮＨｏｎｇ牞ＹＡＯＷｅｎｂｉｎｇ ＳｃｈｏｏｌｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　ＴｈｅａｓｓａｙｍｅｔｈｏｄｏｆＧＬＰ１ｒｅｃｅｐｔｏｒｂｉｎｄｉｎｇａｆｆｉｎｉｔｙｆｏｒａｌｏｎｇａｃｔｉｎｇｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃｐｅｐｔｉｄｅ—ＰＥｇｙｌａｔ ｅｄＥｘｅｎｄｉｎ４ａｎａｌｏｇｕｅ牗ＰＥ牘ｗａｓｏｐｔｉｍｉｚｅｄａｎｄｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｌｕｃｉｆｅｒａｓｅｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅａｐｐｒｏａｃｈ．ＣＨＯ ＋ ＧＬＰ１ＲＣＲＥＬｕｃ ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｐｒｅｖｉｏｕｓｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｉｎｏｕｒｌａｂｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙｔｈｅｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙＴｈｉｓ ａｓｓａｙｍｅｔｈｏｄｓｈｏｗｅｄｇｏｏｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｎｄｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓａｓｗｅｌｌａｓｈｉｇｈａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｐｒｅｃｉｓｉｏｎｗｈｅｎＰＥｗａｓｉｎｃｕｂａ ｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｅｌｌｆｏｒ４ｈ牞ｔｈｅｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｓｕｂｓｔｒａｔｅｒｅａｃｔｅｄｗｉｔｈｃｅｌｌｌｙｓａｔｅｓｆｏｒ１５ｍｉｎａｎｄｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｆｏｒ