微生物的代谢调控与代谢工程.pptVIP

共价调节酶调节的特点 变构酶的反应动力学性质 变构酶的反应动力学不同于普通酶的，它不符合米氏动力学方程式。 普通酶反应速度和底物浓度的关系为： V=（Vmax[S]）/（Km+[S]） 变构酶反应速度和底物浓度的关系为： V=（Vmax[S]）n/（Km+[S]n） V：酶促反应速度，Vmax：最大反应速度，S：底物浓度，Km：米氏常数，n：亚基数 变构酶的反应速度与底物浓度（或变构抑制剂的浓度）的关系曲线呈S型，有协同性；当底物或效应物浓度极低时，酶反应速度的变化极微小，这是因为效应物浓度极低时，不具有协同性，当效应物浓度超过某个水平（阈值）时酶反应速度急剧增大（减小）。即存在着底物或效应物对反应速度发生影响的阈值。这在代谢控制上具有很大的生理意义。 变构酶的脱敏作用（desensitingation） trp operon阻遏系统——终产物的阻遏机制 在某种意义上，可把ATP当作糖代谢的末端产物。当ATP过量时会对合成ATP系统产生反馈抑制。当ATP分解为ADP、AMP 、Pi时。将其能量供给合成反应时，ATP生物合成的反馈调节被解除，ATP又得以合成。因此，能量不仅调节生成ATP的分解代谢酶类的活性，也能调节利用ATP的生物合成酶类的活性。糖代谢和中心代谢途径中的酶活性受能荷的调节。 氨基酸的分泌 对于微生物细胞的氨基酸的分泌机制尚不够清楚，一般认为，无论哪种微生物细胞内氨基酸库中最多的谷氨酸（G-细菌细胞未发现有游离的氨基酸），因此正常培养下，微生物有少量氨基酸（尤其是Glu，Asp）的分泌， 在霉菌和细菌培养液中发现有1mg/mL左右。 微生物在增殖旺盛期，由于蛋白质大量合成，细胞内库存氨基酸减少，这时游离的谷氨酸大约只有最大量的二分之一，只有当细胞内生物合成的氨基酸不被用于合成蛋白质或其它代谢系统时，使库存量提高，才容易作为排出物向细胞外分泌。 与氨基酸吸收的情况一样，氨基酸分泌机制因菌种及氨基酸种类而异。其中谷氨酸产生菌的谷氨酸分泌进行了大量研究，其机制概括如下： 1. 当谷氨酸产生菌增殖时，细胞壁膜扩增和形成间体时，细胞伸长2倍长度时，再加上缺乏生物素等条件影响，停止谷氨酸产生菌分裂，谷氨酸用于合成蛋白质或其它代谢系统停止，细胞内谷氨酸库大量增加，再加上谷氨酸产生菌不发生自溶，细胞仍有活力，将葡萄糖通过其生物合成途径，源源不断地生物合成谷氨酸，为从细胞内——细胞外分泌谷氨酸提供必要的充分条件。 2. 通过控制生物素、油酸、甘油的亚适量或表面活性剂等，使谷氨酸产生菌的细胞合成不完全，使其磷脂含量降低为正常细胞的二分之一左右，或通过添加青霉素等破坏细胞壁合成，从而导致细胞膜的渗漏，使谷氨酸大量向细胞外分泌，排出的谷氨酸可达总游离氨基酸的92%左右。 核苷酸分泌 核苷酸是不易分泌出细胞外的，实验证明Mn2+对产氨短杆菌核苷酸分泌起关键作用。Mn2+可引起细胞形态的变化，在IMP(腺苷酸）发酵中，控制Mn2+（限量）造成细胞膨胀的不规则形态，膜产生异常，非常专一性的膜透性被破坏，核苷酸生物合成补救途径酶系[PRPP激酶、Hx（次黄嘌呤）焦磷酸化酶]及Hx和R5-P都分泌于体外，在体外大量生物合成IMP。但当Mn2+过量时，菌体呈小球状，抑制了这些物质的分泌。 IMP和XMP都是糖磷酸酯，仅在嘌呤残基2值上有无羟基之别。产氨短杆菌在Mn2+过量下生长，IMP完全没有分泌，但XMP分泌性却很好。Mn2+限量时，细胞脂肪酸含量提高，该机制尚未清楚，最近也有报导抗生素、表面活性剂等物质可调节膜的核苷酸分泌。 蛋白质（酶）的分泌 不论是原核还是真核生物，在细胞质内合成的蛋白质需定位于细胞的特定区域或者分泌出胞外。也就是说，基因表达不仅是把DNA转录成RNA，RNA翻译为蛋白质，还要实现把合成的蛋白质精确地输送或分泌到位。这是近年来分子生物学研究的一个十分活跃的领域。因为这不仅是一种基因表达调控的理论，而且与生物工程工业化生产有关，也就是说不仅要解决基因高效表达，还要解决其产物分泌；这是当前基因工程、生物工程急需解决的问题。 1、信号顺序被翻译为信号肽，信号肽一旦出现就会引导核糖体到膜上。 2、信号肽在膜上可识别一个或多个受体蛋白，通过氨基酸末端的碱性区与膜带负电荷的内面受体蛋白结合。 3、当新生肽正在跨越膜时，信号序列和其后的肽段折成两个短的螺旋酶，并曲成一个反向平行的螺旋发夹，该发夹结构可插入到疏水的脂质双层中。 4、蛋白质翻译时信号序列的疏水核心不