抗蚜虫PPA基因高效表达载体构建及其在小麦原生质体中的表达验证-植物学专业毕业论文.docxVIP

河北科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所甲交的学位论文，是本人住导师的指导‘卜．。独立进行研究．I：作所 河北科技大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所甲交的学位论文，是本人住导师的指导‘卜．。独立进行研究．I：作所 取得的成果。对本文的{i丌究做出重要贡献的个人雨l集体．均已在文中以明确方式标明。除 文中已经注明引川的内弈外．本论文不包含任何其他个人。砭集体己经发表或撰弓过的什品 歧成果。本人完全意识土0本声明的法律结果由本人承担。 船蒡 印}1年r月“同 弘11年歹月f6日 河北科技大学学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解：学校有关保留、使用学何论文的规定。同意学校保留并向 国家有关部f J或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权河北 科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 口保密，在一年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 ．日采保密。 (请在以上方框内打“√”) 学位论文作者签名：友娃． 指导教师签名≤羹蝌 汕11年歹月『6同 p¨年厂月，；同 摘 摘 要 摘 要 虫害是威胁农业生产的一个世界性问题，利用转基因技术创造新的抗虫植物品 系对农业害虫防治、环境保护及农业可持续发展具有重要意义。目自玎国内对．于植物 凝集素抗虫基因转化研究大多集中于雪花莲凝集素(Galanthus nivalis Agglutinin， GNA)基因。天南星科半夏属的掌叶半夏为我国特有的中草药，掌叶半夏块茎的粗 提液对蚜虫有强致死作用，粗提液的主要成分是植物凝集素蛋白(Pinellia pedatisecta agglutinin，PPA)。转半夏凝集素基因的烟草具有比转雪花莲凝集素基因更强的抗 桃蚜活性。 在单子叶植物中应用较广的为玉米泛素启动子ubi，它有着启动效率高、甲基化 程度低、遗传性状稳定等优点，Ubi启动子在转基因小麦中有较高活性，表达效率可 达到CaMV35S启动子的4．5倍。绿色荧光蛋白(GFP)是源于海洋生物水母属 (彳eg“D厂明McfD，．妇)的一种发光蛋白，它作为报告分子有许多优点：稳定、灵敏度 高、荧光反应不需要任何底物及辅助因子，使表达检测非常简单，同时它在细胞中 自主表达、没有种属特异性、对受体细胞无毒性、对目的基因没有影响。 本试验的目的是将PPA基因连接到植物表达载体pCAMB埝1380上(以Ubi为 启动子、GFP为报告基因)，从而构建出一个抗蚜虫的高效植物表达载体，为小麦 的遗传转化奠定材料基础，为植物特别是农作物害虫防治提供了新的基因资源。 本文运用基因工程技术对掌叶半夏凝集素PPA基因进行改造，并将其转入真核 表达载体，得到以下成果：1、成功构建植物高效表达载体pUGP，该载体包含玉米 泛素启动子Ubi、掌叶半夏凝集素PPA基因和绿色荧光蛋白GFP基因，为后续的蛋 白表达实验和功能实验提供实验平台和基础材料。2、成功制备小麦原生质体，并对 其进行了表达验证。 关键词 真核表达载体；植物凝集素；PPA基因；泛素；原生质体；瞬时表达 河北科技人学硕十学何论文Abstract 河北科技人学硕十学何论文 Abstract The pest is a worldwide problem threating to agricultural production．It’s significant to create new insect-resistant plant strains with transgenic technology f6r ag“culture pest control，enVironmental protection and sustajnable deVelopment of a鲥culture．Cullrently， the plant lectin insect-resistanl genes are mostly focused on the Galanthus nivalis Agglutinin(GNA)gene．Pinella is one endemic specie of Chinese herbal medicine．the ．cn埘e extract矗．0m Pinellia pedatjsecta has a strong lethal effect on aphids，and the main component is Pinellia pedatisecta agglutnin，PPA．TbbaccOs with the agglutinin gene ftom Pinellia temata harbor more resistan