分子病理学技术在临床中应用.pptx

分子病理学在临床医学中的应用分子病理学的诞生 近十几年来，医学获得了分子生物学理论和实验的充实，建立起许多完全崭新的临床检验方法，甚至部分替换某些旧的传统检测方法。 从广度上-----扩大了临床观察视野 从深度上-----达到基因分析境界 分子病理学在此基础上诞生并发展起来。分子病理学作为病理学的一个现代分支，为国内外所公认。分子病理学的发展 分子病理学的发展由始即以拥有大量实验、技术逐日进步为特征，并彼此相辅相成。分子生物学家不熟悉疾病，临床学家忙于临床防治疾病，使分子生物学当代理论和实验及时的引进、提炼并为临床诊断、认识疾病服务，这一历史任务，落在病理学工作者的肩上。病理诊断技术经典的HE切片观察辅助技术1、特殊染色技术2、免疫组织化学技术3、分子生物学技术病理学历史：器官?细胞?分子（分子病理）器官（解剖）病理学 (Organ pathology,1761)：肉眼观察细胞（组织）病理学 (Cellular pathology,1854)：L/M观察超微结构病理学 (Ultrastructural pathology )：E/M观察免疫病理学 (Immunopathology)：免疫组化分子病理学（Molecular pathology）遗传病理学（Genetic pathology）定量病理学（Quantitative pathology）一项覆盖了9个国家和地区，1217例病人的泛亚洲科研显示：没有相关的靶标却接受了靶向治疗，死亡风险将增加185%。 —— 新英格兰医学杂志.2009.9.v361(10).“我知道每个患者不一样，而且需要个体化治疗，但我更需要知道他们有何不一样，如何根据这些不一样来实施个体化治疗。” —— 一位中国临床肿瘤医生, 2009分子靶向治疗的概念分子靶向治疗是指“针对参与肿瘤发生发展过程中的细胞信号转导和其他生物学途径的各种阻抑手段”，其治疗靶点可以是细胞表面的生长因子受体或者细胞内信号转导通路中的重要酶或蛋白。广义的分子靶点则包括参与肿瘤细胞分化、分裂、凋亡、迁移、浸润、淋巴结及全身转移过程，从DNA 到蛋白水平的任何亚细胞分子。靶向治疗与个性化治疗医学分子生物学领域的革命不断影响着肿瘤的诊断和治疗。在规范化治疗的基础上逐步发展为个性（体）化治疗。个性（体）化治疗的核心是靶向治疗。分子病理诊断是靶向治疗的基础。基因诊断的定义 基因诊断是通过直接探查基因的存在状态或缺陷对疾病作出诊断的方法。基因诊断的探测目的物是DNA或RNA。 DNA----反映了基因的存在状态 RNA----反映了基因的表达状态探查基因的分类内源基因----机体自身的基因 用于诊断基因有无病变外源基因-----如病毒，细菌等 用于诊断有无病原体感染分子病理学诊断分子病理学理论与技术的应用，拓宽了病理诊断的视角，发展了新的研究领域。分子病理学诊断在指导肿瘤治疗中拥有特殊优势，即在组织学的基础上对肿瘤基因状态进行精细的分类和检测： 1 增加诊断的准确性、改善预后的评估，并指导临床处理。2 区别不同基因类型的病人，设计合理的临床治疗方案。 3 增加药物的特异性和安全性，最大限度地优化治疗。 4 识别癌症易受攻击部位的信号途径，选择药物的靶点。 5 检测治疗中基因表达的变化，随时调整治疗方案。 相对于其他疾病，肿瘤临床治疗的有效率目前仍然偏低。随着人类基因组学、药物基因组学及肿瘤分子生物学研究的不断深入和发展，人们对肿瘤多成因、异质性的特点有了更加全面的认识。个体化治疗已经成为肿瘤临床治疗的发展方向和最有效的手段。 但是，如何识别具有相同肿瘤发生部位、相同病理类型及病期的不同患者之间存在的差异成为实施个体化治疗的主要障碍。大量的临床研究和试验结果表明：特异肿瘤分子标志物（靶标）是识别患者个体差异的重要依据，实现对这些靶标的检测是实施肿瘤个体化治疗的前提和基础。 用于识别肿瘤患者个体差异的靶标大致可归纳为三类：1）肿瘤治疗性药物的作用靶标: 如HER2基因拷贝数和EGFR基因突变；2）肿瘤药物代谢相关的靶标: 如UGT1A1和CYP2D6等基因多态性；3）肿瘤药物作用路径的相关靶标: 如KRAS基因突变和ERCC1基因mRNA表 达水平。 随着抗肿瘤药物的不断增加以及研究的深入，与作用路径有关的靶标越来越多。检测也从以前的单一靶标发展为多靶标联合进行。通过针对不同癌种的系统靶标检测，筛选适合患者个体的药物，提高治疗的针对性和有效率。 分子病理学用于基因诊断的常用手段 原位杂交：CISH(显色原为杂交)； FISH（包括单色和多色）； SISH（双标，银染色）。DNA序列分析：DNA-SEQUENCING; PCR-RFLP; PCR-SSCP; D-HPLC;其他:包括基因芯片、实时定量PCR、 Southern、Western