慢性炎症刺激对小鼠主动脉内皮脂肪酶表达影响的研究-内科学（心血管病）专业毕业论文.docxVIP

山东大学硕士学位论文 山东大学硕士学位论文 CONTENTS Chinese Abstracts 1 Eng¨sh Abstracts 5 Abbreviations 11 IntrOduction 13 Mate r-aIs and Methods 17 ResuIts 29 DiscussiOn 33 COncIusiOns 37 Figu res and TabIes 39 References 47 AcknowIedgement 51 Research papers pubIished 52 万方数据 山东大学硕士学位论文慢性炎症刺激对小鼠主动脉内皮脂肪酶表达影响的研究 山东大学硕士学位论文 慢性炎症刺激对小鼠主动脉内皮脂肪酶表达影响的研究 硕士研究生：张炎 专 业：内科学(心血管病) 导 师：朱清教授 中文摘要 1研究背景和目的 心脑血管疾病己成为威胁人类健康的头号杀手，动脉粥样硬化则是其重要 的致病因素之一。目前认为，动脉粥样硬化发生和发展的主要原因是脂质代谢 紊乱和炎症反应，虽然它们各自都是动脉粥样硬化独立的危险因素，但越来越 多的研究表明，二者在动脉粥样硬化的发生发展过程中是相互影响和相互促进 的。 内皮脂肪酶是近年来新发现的甘油三酯脂酶家族的成员，在脂代谢过程中 发挥着重要作用。内皮脂肪酶主要具有磷脂酶活性，是高密度脂蛋白代谢的关 键酶，其主要由内皮细胞分泌产生，肝细胞和平滑肌细胞等也可有少量分泌。 高密度脂蛋白是动脉粥样硬化发生发展过程中的保护性因素，因而抑制EL的活 性或减少EL的表达，可能在一定程度上抑制动脉粥样硬化的发生发展。EL的表 达调控受多种因素影响，炎症、血压及血管剪切力等都可影响EL的表达：此外， ANGPTL3是由肝脏分泌产生的一种细胞因子，在脂质代谢中发挥重要作用。相关 研究表明其可能是内源性的EL抑制剂。由于炎症是动脉粥样硬化重要的致病因 素之一。因此，进一步明确炎症调控内皮脂肪酶在体内表达的机制，则可能为 我们在脂质代谢紊乱和炎症反应之间构建一个新的桥梁，进而为动脉粥样硬化 的研究和干预提供新的思路。 脂多糖(LPs)是重要的炎症反应的刺激物，它可以选择性的作用于细胞表面 的T0¨样受体4(TLR一4)，从而激活细胞内的炎症反应信号通路，例如NF—K B信 号转导通路等，研究已表明LPs可促进动物及人类的动脉粥样硬化的发生和发 展。NF—K B信号转导通路和p38MAPK信号转导通路都是炎症反应时细胞内重要 的信号传导系统。研究表明，其可能是各种危险因素导致动脉粥样硬化的机制 之一。PDTC是一种金属离子螯合剂，其可以竞争性抑制I BⅡ的释放，进而抑 万方数据 山东大学硕士学位论文制NF—K 山东大学硕士学位论文 制NF—K B信号传导通路的激活。sB203580可以选择性的抑制p38MAPK的激活， 而对于JNK／SAPK和p44／42MAPK(即Erkl／2)无显著作用。本课题以野生型 c57BL／6小鼠和ApoE-／-小鼠为研究对象，通过腹腔注射脂多糖作为慢性炎症刺 激，观察在体内炎症环境下脂多糖对小鼠主动脉内皮脂肪酶(EL)、NF—K B p6s、 p38MAPK及磷酸化的p38MAPK的表达影响，同时观察他汀类药物(阿托伐他汀 钙)对该效应的抑制作用。此外通过腹腔注射NF．K B信号通路阻断剂PDTC和 p38MAPK信号通路阻断剂sB203580进一步验证脂多糖是否通过NF．K B和 p38MAPK信号传导途径调节小鼠主动脉内EL的表达。 2研究方法 2．1动物模型的建立 选取8周龄野生型雄性C57BL／6小鼠共40只，8周龄雄性ApoE一／一小鼠共8 只，适应性普食喂养一周后，改为高脂饮食(15％黄油，0．25％胆固醇)喂养。 实验分组共分为六组，每组8只，包括：①LPS(C57BL／6)组：腹腔注射 LPS(2mg／kg)，每周三次，持续12周；②LPS(ApoE一／一)组：同样给予腹腔注射 LPS(2mg／kg)，每周三次，持续12周：③阿托伐他汀钙组：腹腔注射LPS(2mg／kg)， 同时给予阿托伐他汀钙悬液灌胃(20mg／kg／d)，持续12周：④正常对照组：腹 腔注射生理盐水(2mg／kg)，每周三次，持续12周：⑤PDTC组：腹腔注射 LPS(2mg／kg)，同时给予PDTc(20mg／kg／d)腹腔注射，持续12周；⑥sB203580 组：腹腔注射LPS(2mg／kg)，同时给予SB203580(5ug／kg／d)腹腔注射，持续1 2 周。在药物干预的12周末，对各组小鼠进行安乐死。 2．2血脂测定 前4组(LPS(C57BL／6)组，LPS(ApoE一／一)组，阿托伐他汀钙组，正常对照组) 小鼠处死前，空腹经心脏采血，收集血清，检测甘油三酯(T