二细菌培养与常见生化反应20190304.PPTVIP

细菌分离培养与常见生化反应1：培养细菌---如何培养一株纯种细菌? 2：寻找细菌----细菌分布在哪里？ 3：鉴别细菌----不同细菌的生化反应能力不同 本次实验解决三个问题 如何培养一株纯种细菌? 讨论: 细菌的生长条件 实验室培养---无菌操作 ---细菌接种方法 ---菌种鉴定: 生化反应 细菌的生长条件---培养基 ????? （1）水分?? 人工培养细菌应用蒸馏水、无离子水。（2）含碳化合物??? 葡萄糖、乳糖、蔗糖及麦芽糖。（3）含氮化合物???? 蛋白胨、氨基酸及尿素等。（4）矿物质????? 常用氯化钠，其次磷酸氢二钾等。（5）生长因子?? 动物血清、酵母浸出物等。 细菌的生长条件---气体环境 根据细菌呼吸对氧的需要程度分： （1）专性需氧菌?????? （2）专性厌氧菌---破伤风梭菌等 ---缺少完善的呼吸酶系统 ---厌氧培养箱 （3）微需氧菌 （4）兼性厌氧菌 细菌的生长条件---温度等 适宜的温度 合适的酸碱度：多数病原菌最适PH为中性或弱碱性（pH7.2～7.6）( 真菌,结核杆菌,霍乱弧菌)  渗透压 消毒与灭菌 消毒（disinfection) ---采用较为温和的理化因素杀死大部分病原微生物的过程，并不一定能杀死含芽孢的细菌和一些非病原微生物。 灭菌（sterilization) ---采用强烈的理化因素杀死物体表面以及内部所有微生物的方法。包括杀死病原和非病原微生物，繁殖体和芽孢等，从而达到无菌的状态。 常用化学方法 化学消毒剂：含氯消毒剂，醇类（75%乙醇消毒效果最好），碘伏 熏蒸或喷雾消毒：过氧乙酸、过氧化氢、甲醛喷雾消毒 常用物理方法 干热灭菌法---火焰灼烧，干烤箱（160℃/2-4h) 湿热灭菌法---高压蒸汽灭菌锅（115 ℃ /30min；121 ℃ /20min） ，煮沸灭菌，低温间歇灭菌等 滤过除菌法---0.22μm孔径滤膜 射线灭菌法---紫外杀菌 无菌操作 概念 ---指在无菌室或超净台中进行以防止微生物进入人体或污染供试菌的操作技术。无菌操作是各种生物实验和生产实践中一项重要的基本操作。 目的 ---保证无菌区域样本或物品不被污染。 无菌操作技术要点 无菌操作环境：酒精灯无菌区，超净工作台，生物安全柜（SOP） 无菌操作器具：试管，培养基等灭菌 无菌操作人员：口罩，手套，手部消毒 具体无菌操作：酒精灯或红外灭菌器灼烧接种环；开启或加盖培养器具时，火焰灼烧除菌，等。 生物安全柜原理与操作规范 生物安全柜的基本工作原理 生物安全柜的工作原理主要是将柜内空气向外抽吸，使柜内保持负压状态、安全柜内的气体不能外泄从而保护工作人员； 外界空气经高效空气过滤器过滤后进入安全柜内，以避免处理样品被污染，保护样本； 柜内的空气也需经过高效空气过滤器过滤后再排放到大气中以保护环境。 生物安全柜的工作原理――气流示意图 房间空气 污染空气 经滤过器过滤气体 生物安全柜标准操作规程 用1%新洁尔灭溶液或75%乙醇擦净生物洁净安全柜台面； 接通电源，开启紫外灯开关，进行紫外消毒30分钟； 临使用前5min打开送风电源开关，使用前关闭紫外灯，打开照明开关； 提起玻璃门至适合高度（报警器未报警），进行相关实验操作； 实验操作结束后，继续运行2-3min进行内部清洁； 用1%新洁尔灭溶液或75%乙醇或消毒湿巾擦拭消毒台面，实验完毕关闭送风电源开关及照明灯，闭合玻璃门，开启紫外等照射消毒30 min。完成室内的整理及清洁工作，做好使用记录。 细菌接种 视频播放 操作:（教师示范）以大肠杆菌,痢疾杆菌为菌种，练习接种液体，半固体,固体斜面,平板培养基（每人1套，四人同时生物安全柜内操作）。 观察: 细菌在液体,固体,半固体,平板上的生长状态(示教) 平板划线法 注意事项??????? 不要说话，严格无菌操作 灼烧后接种环要冷却 划线时用腕力，不要使接种环嵌入琼脂 各个分区要分明 在培养皿底部贴标签 倒置培养――防止细菌被冲散??? 斜面接种法 （1）用左手握住菌种管和斜面培养基管，右手持接种环或接种针。 （2）用右手小指与手掌、小指与无名指分别拔出两管的棉塞，将管口通过火焰灭菌。 （3）用接种环或接种针伸入菌种管内，挑取用来接种的菌苔。 （4）伸入斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上蜿蜒划线。 （5）接种完成之后，用火焰灭菌培养管口，并塞上棉塞，置于37℃培养。 半固体