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生物氧化实验报告 　　孝感学院生命科学技术学院实验报告　　专业：姓名：实验二油脂酸价的测定　　一、目的与要求　　初步掌握测定油脂酸价的原理和方法；了解测定油脂酸价的意义。二、实验原理　　油脂在空气中暴露过久，部分油脂会被水解产生游离脂肪酸和醛等物质，并且这些物质具有　　刺激性气味，使油脂产生酸价。酸败的程度使以水解产生的游离脂肪酸的多少为指标的，常以酸价或者是酸值来表示。同一油脂若酸价高，则说明水解产生的游离脂肪酸就多。　　酸价是指中和1g油脂中游离脂肪酸所需的氢氧化钾的毫克数。酸价越高，油脂的质量也越差。　　三、主要仪器、实验材料和试剂　　1.锥形瓶3个；2.量筒1支；3.碱式滴定管1支；4.花生油、菜油、芝麻油等；5.乙醇-乙醚混合液(1:1,V/V)；6.％KOH。　　四、操作步骤　　1.准确称取1~2g油脂于250mL锥形瓶中。　　2.在瓶内加入乙醇－乙醚混合液50mL，充分振荡，使油脂样品完全溶解成透明溶液。待油样完全溶解后，加入1％酚酞指示剂3～5滴，立即用％KOH标准溶液滴定至溶液成微红色为终点，并记录用去的KOH的体积，并按下式进行计算。酸价＝2(V2-V1)/W　　V2：滴定油样时耗用氢氧化钾溶液的毫升数V1：滴定空白对照耗用氢氧化钾溶液的毫升数W：油样重(g)　　注：滴定过程中如出现混浊或分层，表明由碱液带进水过多，乙醇量不足以使乙醚与碱溶液互溶。一旦出现此现象，可补加乙醇，促使均一相体系的形成。　　五、实验结果　　六、思考题　　请对你的实验结果进行分析。　　批阅教师：年月日　　孝感学院生命科学技术学院实验报告　　专业：学号：姓名：实验三蛋白质的提取及浓度测定(紫外吸收法)　　一、目的与要求　　掌握蛋白质的提取方法；学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；熟练掌握紫外分光光度计的使用方法。　　二、实验原理　　大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。　　由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280nm波长处。在此波长范围内，蛋白质溶液的光密度OD280nm与其浓度呈正比关系，可作定量测定。　　三、实验材料、主要仪器和试剂　　1.试验材料：萌发3天的小麦种子2.主要仪器　　紫外分光光度计，离心机试管与试管架，刻度吸量管研钵100mL容量瓶　　3．试剂：标准牛血清蛋白溶液：准确称取经凯氏定氮法校正的结晶牛血清蛋白，配制成浓度为1mg/mL的溶液。　　四、操作步骤　　1．蛋白质的提取　　称取1g萌发3天的小麦种子，置于研钵中，加入少量石英砂和2mL蒸馏水，研磨匀浆。将匀浆倒入离心管中，用6mL蒸馏水分次将残渣洗入离心管。提取液在室温下放置提取15～20min，每隔数分钟搅动1次，使其充分提取。然后在3,000r/min转速下离心10min，将上清液倒入100mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即为蛋白质原液，用于蛋白质浓度的测定。　　2.标准曲线制作　　按表1分别向每支试管内加入各种试剂，混匀。以光程为1cm的石英比色杯，在280nm波长处测定各管溶液的光密度值OD280nm。以蛋白质浓度为横坐标，光密度值为纵坐标，绘出标准曲线。　　年月日　　表1蛋白质标准曲线制作　　管号　　标准蛋白质溶液蒸馏水　　0　　　　4　　0　　蛋白质浓度　　0　　　　OD280nm　　3.样品测定　　取提取的蛋白质溶液，按上述方法测定280nm的光密度，并从标准工作曲线上查出提取蛋白质溶液的浓度。若提取蛋白质溶液的浓度大于，超出测量范围，则稀释后再测，计算蛋白质浓度时乘以稀释倍数。　　蛋白质浓度=　　五、思考题　　1.为何要在280nm波长下测定蛋白质浓度？在其它波长下测定可以吗？2.如果考虑核酸的存在，蛋白质浓度的实际的值比测量值是大还是小？为什么？　　孝感学院生命科学技术学院实验报告　　专业：学号：姓名：实验四淀粉酶活力的测定　　一、目的与要求　　学习和掌握测定淀粉酶活力的原理和方法。　　二、实验原理　　淀粉是植物最主要的贮藏多糖，也是人和动物的重要食物和发酵工业的基本原料。淀粉经淀粉酶作用后生成葡萄糖、麦芽糖等小分子物质而被机体利用。淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。α-淀粉酶可随机地作用于淀粉中的α-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，同时使淀粉的粘度降低，因此又称为液化酶。β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，每次水解下一分子麦芽糖，又被称为糖化酶。淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-