麦芽糖转糖基酶在毕赤酵母中的表达及活性分析-生物化工专业毕业论文.docxVIP

摘要摘要 摘要 摘要 麦芽糖转糖基酶是一种4．仅．葡聚糖转移酶，能催化直链淀粉环化生成大 环糊精。大环糊精具有筒状疏水内腔和亲水外表结构，可以广泛应用于食品、 医药、化工等行业。麦芽糖转糖基酶在生物(包括微生物)体内含量很低， 不能满足制备大环糊精和科研的需要。本文从Ec0，f BL2l(DE3)plysS中扩增 得到麦芽糖转糖基酶基因(^勿垃)，构建了表达载体pPIC9K-^彻投，S研I线 性化，电击转化入毕赤酵母(尸砌幻p珊幻，．西)GSll5感受态细胞中，成功构 建了一株基因工程菌pPIC9K坝／GSll5。利用O．8％甲醇诱导表达，表达 上清进行转糖基活性分析，TLC结果显示表达上清液具有糖基转移酶作用， 证实麦芽糖转糖基酶在毕赤酵母中成功表达。表达产生的麦芽糖转糖基酶和 直链淀粉反应，制备得到一系列大环糊精的混合物。本文主要结论如下： (1)PCR扩增得到的尬投基因，构建了表达载体pPIC9K-尬垃。对其 进行酶切和测序分析。测序结果经BLAST比对，与GellBanl【中报道的E∞乃 BL21(DE3)胁心基因的同源性为100％。 (2)表达载体用S拼I线性化，电击转化入毕赤酵母GSll5感受态细胞 中，构建了基因工程菌pPIC9K．拖，Q／GSll5。0．8％甲醇进行诱导表达。表达 上清液与麦芽糖溶液反应，TLC结果显示：上清液具有糖基转移酶活性。 SDS电泳显示，