慢性脑血管痉挛的机理及EDS的作用研究-外科学(神经外科学)专业毕业论文.docxVIP

慢,le_藏an管痉挛的枧理及EDS酌作罨研究摘 慢,le_藏an管痉挛的枧理及EDS酌作罨研究 摘 要 背景：蛛网膜下腔出血诱发的慢性脑血管痉挛(chronic cerebral vasospasm，CVS)是SAH致死或致残的主要原因。CVS发生的病嚣和机理 研究己持续了数十年，至今尚未完企阐明。实验和临床研究表明，针对脑 血篱平滑肌持续收缩的药物治疗措施只能农早期或一定程度上改善CVS， 对予后期或严重的CVS均激法缓解。大量研究发现SAH患者尸梭和实验 性SAH的动物模型中均存在痉挛的斑管肌层坏死、增生，媳管壁明显增厚 并俘有炎疲细胞浸润等改交，有证攒表明炎症反应在eVS的发生和发震中 也发挥了重要作用，其中细胞间粘附分子一1(intracellular adhesionmolecule ～l，ICAM．1)可能楚作为炎瘫过程中起关键作角的黼附分子，参与了SAH 后m管壁免疫炎症反应和脑盥管痉挛的发生，但具体的机制尚不清楚。因 诧脊学者试为CVS豹实震可麓盘于盘管璧免疫炎症反应淡及血管平滑魏 细胞(vascular smoothmuscle ceils，VSMC)过度增殖造成瘸理性的狭窄， 嚣{#仅为功髓往鹃救缩。戳往麓大豢研究王作主要楚围绕VSMC持续投缩 进行的，对觑管壁损害增殖改变研究并未引起广泛震视，殿主要魁通过在 落动物搂鍪避行蕊浆，磅究绪采往往差异较大焉存焱争论。 目的：通过原代分离培养的家兔脑微血管内皮细胞(microvessel endothelial cells，BmvECs)、主动躲VSMC帮传代涪养静入脐静豫内皮爨 胞，采用体外孵育的血性脑脊液(bloody cerebralspinal fluid，BCSF)模拟 SAH蘩激嚣素翎备CVS静体努细藏攘壅，观察SAH对EC病理形态学、 增殖、ICAM—l蛋白和mRNA表达的影响，以及相应的EC条件培养液对 VSMC缮黧铰态豹影臻。势鼹察潦矗纯获审药拳藏豹有效残努甄疲甾酮 (Ecdysterone，EDS)在上述环节的干预作用效应，为EDS治疗CVS的 穗廉疲震提供蔹据。 v )亨法々 )亨法々 1．体井分离臻养获释较纯净脑锾盘管肉皮细胞耩主动脉平滑瓢细胞， 并逶过免疫缩艟纯学染色箍定； 2．遥：蘧瘸淫形态学、细聪计数、MTT捡禚《、流式细耱术掏期分析等方 法评髂盎性藏脊溅对BmvECs静毒性帮增建影瘸； 3．分别采用受疫细藏纯学染色和R拳PCR检测BCSF刺激爱脑徽盅篱 蠹皮缎腿、人麟静辣海皮缨聪ICAM-1蛋鑫及mRNA表达； 4。采用魄色法积放射免痰法检测蚊集菩维蠹皮纲胞豹上涛液孛N02‘ 襄ET．1豹交促，逶避醚娌检测、浚式纲腱术躅裳分析、DNA合成帮增 建鳃臌核摭骧(proliferative cell nuclear antigen，PCNA)受疫荧光染惫实验 双察蝴应的内皮绷躯条件培养渡对虫管乎潺飘缨黢螅增蓬效或。 绩果； 1．通过MTT检禊4，孵曹对阅越长，BCSF对EC的镪臌活力撰害越 重，孵育7天的BCSF是较合适鲍刺激因索，霹导致明显螅EC瘗理擐伤， 抑制EC代谢瑚增殖，EDS对EC具考上述改变具窍缳护馋用； 2．BCSF可引起脓微斑管内皮细胞和人媵静脉内皮缨胞lcA燃．1免疫 细胞化学染色增强，人脐静脉走皮细腿ICAM．1mRNA表达上调，EDS对 ICAM—l蛋白和mRNA表达均有抑制作用： 3．BCSF砸促进内皮细胞释放ET-l，并减少NO的生成，其条件培葵 液对VSMc具有明显促进增殖作用，增强pCNA我VSMC的表达；EDS可 改善上述ET．1及NO分泌紊乱，并可减弱相应内皮条件培养液对VSMC 的增殖促进作用和降低PCNA免疫细胞染色强度。 结论： 1．BCSF对体外培养的脑微血鸷内皮细胞具有明显的毒性作用，孵育7 天的BCSF对BmvECs的损害作用基本达高峰，并可维持至12天，这与 I临床上CVS的发瘸时程类似，表明采用本法建立的CVS细腻模型能够反 映在体cVS的变化和特点。 Ⅵ 2．BCSF刺激可引起BmvECs和HLrVECs 2．BCSF刺激可引起BmvECs和HLrVECs ICAM-l的表达上调，这可能 是免疫炎症反应参与CVS发生的机理之一。 3．BCSF可引起BmvECsET．1分泌增多而NO合成降低，而NO和ET一1 平衡紊乱是CVS的始动环节之一，提示临床治疗中应加强对内皮细胞的保 护，减轻其分泌功能的损害。 4．BCSF刺激EC可导致其条件培养液促VSMC增殖作用增强，其物 质基础可能是内皮血管活性物质的分泌紊乱，研究表明SAIl后存在vSMC 增殖条件，提示VSMC增殖参与了CVS的发生。 5．EDS能够减轻BCSF对内皮细胞的形态和分泌功能损害，并减轻其 条件培养液的促VSMC增