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山东大学理学硕士论文原创性声明
山东大学理学硕士论文
原创性声明
本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进 行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何 其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡 献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的 法律责任由本人承担。
论文作者签名:垒也茧日
关于学位论文使用授权的声明
本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家 有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅:本人授权山东大 学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印 或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。
(保密论文在解密后应遵守此规定)
论文作者签名:童也萌导师签名:壑:!:望日期:趔5生£丘塑E{
山东大学理学硕士论文符号说明
山东大学理学硕士论文
符号说明
缩略词 英文全称 中文全称
ATP Adenosine triphosphate 腺苷三磷酸
BCP Bombyx mori cysteine proteinase 家蚕半胱氨酸蛋白酶 DCP Drosophila melanoguster cysteine proteinase 黑腹果蝇半胱氨酸蛋白酶 DFP Diisopropyl fluorophosphates 二异丙基氟磷酸
EDTA Ethylenediaminetraacetic acid 乙二铵四乙酸
ESP Egg specific protein 卵特异性蛋白
GST Glutathion S-tmnsferase 谷胱甘肽S一转移酶
HCB Helicoverpa armigera cathepsin B-like棉铃虫组织蛋白酶B
protemase
HRP Horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶
IPTG Isopropylthio—B—D—galactoside 异丙基硫代一B—D-半乳糖苷
PBS Phosphate—buffered saline 磷酸缓冲盐溶液 苯甲烷磺酸氟化物
SCP Sitophiluszamias eysteine proteinase 象鼻虫半胱氨酸蛋自酶
SDS Sodium Dodecyl Sulfate 十二烷基硫酸钠
TBS Iris.bufier saline Tris缓冲盐溶液
Tris—HCI Tris hydrochlorid Tris盐酸盐
VCB Ades aegypti vitellogenic eysteine 埃及伊蚊半胱氨酸蛋白酶
山东大学理学顶士旦文棉铃虫组织蛋白酶B组织分布及不同发育阶段的表达研究
山东大学理学顶士旦文
棉铃虫组织蛋白酶B组织分布及不同发育阶段的表达研究
摘 要
昆虫体内存在多种蛋白酶,主要发挥蛋白水解功能,如消化道内蛋白酶分解食物供 给身体所需营养,卵内蛋白酶在昆虫胚胎发育过程中水解卵黄蛋白供给胚胎发育所必需 的氨基酸,因此对昆虫的生长发育具有很重要的作用。至今己对家蚕、果蝇、蝗虫、象 鼻虫和蚊子等多种昆虫体内的蛋白酶进行了研究,所报道存在的蛋白酶大多属于半胱氨 酸蛋白酶类、丝氨酸蛋白酶类和天冬氨酸蛋白酶类,这些蛋白酶~般是由脂肪体合成, 然后再转运到不同的部位经过活化之后发挥作用。
本实验室从棉铃虫卵巢中纯化得到了一种蛋白酶,通过SDS.聚丙烯酰胺凝胶电泳 测得其分子量为30kDa,根据其能被半胱氨酸蛋白酶的特异性抑制剂E一64抑制,鉴定 出这是一种半胱氨酸蛋白酶,又通过对其氨基酸N端序列的测定确认它属于组织蛋白 酶B。我们已对该蛋白酶的性质、抑制因子、以及合成部位等生化过程进行了系统的研 究;克隆出编码该蛋白酶的全长基因并在大肠杆菌BL21中表达了该蛋白酶。对于组织 蛋白酶B(HCB)在棉铃虫不同组织中韵分布及在不同发育阶段的表达也已经作了一些 初步研究。弄清组织蛋白酶B在棉铃虫体内的组织分布及其在整个生长发育阶段的表 达规律,有助于深入了解蛋白酶的生理功能。
本文在前人工作的基础上,利用从大肠杆菌BL21菌株中纯化得到的重组表达的棉 铃虫组织蛋白酶B免疫家兔,制备了兔抗HCB抗血清,该抗血清不但识别大肠杆菌中 表达的重组棉铃虫组织蛋白酶B,还可以识别PiehJa酵母、昆虫细胞表达的重组棉铃虫 组织蛋白酶B以及棉铃虫卵巢匀浆液内的组织蛋白酶B。
通过免疫印迹法检测到棉铃虫卵、幼虫血淋巴、中肠、表皮、脂肪体、雌、雄蛹脂 肪体、雌性成虫卵巢、脂肪体和雄性成虫脂肪体中有棉铃虫组织蛋白酶B的分布。原 位水解的结果显示只有棉铃虫卵、卵巢和雌性成虫脂肪体中的棉铃虫组织蛋白酶B具
有水解蛋白的活性。
同时,我们制各了不同性别、不同发育时期的棉铃虫
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