抗癌药冬凌草甲素聚乳酸纳米粒的实验研究-药剂学专业毕业论文.docxVIP

山东土学咦士夸位奄文抗癌药冬凌草甲素聚乳酸纳米粒的实验研究 山东土学咦士夸位奄文 抗癌药冬凌草甲素聚乳酸纳米粒的实验研究 专业：药剂学 研究生：邢洁 导师：张典瑞张学顺 中文摘要 冬凌草甲素(oridonin，O砒)为唇形科香茶菜属植物冬凌草(Rabdosiarubescens) 的主要抗癌有效成分，分子中与环外亚甲基共轭的环戊酮结构是其抗癌活性中心。 体外研究表明ORI抗癌谱较广，可通过多种途径诱导癌细胞凋亡，对人肝癌 BEL7402细胞，非小细胞肺癌组织NCI．H520、NCI．H460、NCI．H1299，人白血病 HL．60细胞，食管癌CaES．17细胞及结肠癌HCT8细胞等均有明显细胞毒作用，临床 上也显示了一定疗效。 冬凌草甲素来源于天然植物，成分含量低，提取工艺复杂，原料的短缺已成为 制约其深入研究的因素之一。同时，由于O刚的水溶性差，体内生物半衰期短，目 前有关制剂的抗癌疗效尚不理想，需进行深入研究。 针对上述问题，本文首次将超临界c02萃取与柱层析分离技术联合应用于ORI 的提取与分离，使ORI的制各工艺大大简化，对推动ORI向工业化生产方向发展具 有重要意义。本文以ORI的提取率为考察指标，对夹带剂的种类和萃取时间进行了 单因素考察，确定以95％乙醇为夹带剂效果最理想，萃取时间为3d时。通过正交 实验对超临界C02的萃取工艺进行优化，确定最佳工艺条件为：压力38．5 MPa，温 度40℃，夹带剂用量1．5 111l·分‘。收集萃取所得产物用硅胶柱层析技术进一步分离， 将所得结晶利用红外光谱，紫外光谱和核磁共振波谱等手段进行鉴定，结果证实所 得结晶为冬凌草甲素，HPLC面积归一化法测得样品纯度为(98．2a：0．5)％，能够满足 医药应用要求。 以冬凌草甲素为实验药物，以具有良好生物相容性和生物可降解性的聚乳酸 (polylactic-acid，PLA)为载体材料，采用改良的自乳化溶剂扩散法制备了冬凌草 甲素聚乳酸纳米粒(ORI．PLAoNP)。实验以包封率为主要考察指标，通过均匀设计 法对处方工艺进行了优化，确定最佳处方工艺为：Poloxamer 1880／萨1．O％，有机相： 6 山东土量嘎士学位论文水相=o．7，药物：有机相=o．5，PLA：药物=10，丙酮：乙醇=O．6，转速=400 山东土量嘎士学位论文 水相=o．7，药物：有机相=o．5，PLA：药物=10，丙酮：乙醇=O．6，转速=400 r．miffl。 优化工艺操作简单，所制备的ON．PLA．NP包封率稳定，平均包封率为(91．88士1．83) ％，载药量为(2．32士O．05)％，透射电镜下观察所得纳米粒为类球形实体，表面光 滑不粘连，粒径分布的范围较窄，平均粒径为137．3 nln，zeta电位为(．15．88士0．41) mV，pH值为(5．57士O．04)，粘度为(1．23I士0．002)x10。Ns-m。。 为提高所制备ON．PLA-NP的储存稳定性，本文进一步对所制得的ON．PLA-NP 进行了冻干处理，并以外观、色泽、再分散性为评价指标，对冻干工艺进行了单因 素考察，最终确立的冻干工艺为：以6％的甘露醇为冻干保护剂，预冻温度．80℃， 预冻时间24 h，冷冻干燥时间32 h。冻干前后纳米粒的各主要理化性质的比较结果 表明，冻干工艺对ON．PLA-NP的包封率、载药量、pH值、粘度和表面电位不会造 成显著影响。对冻干品的DSC和x-射线衍射分析结果表明，制成纳米粒后ORI已被 载体包裹，并主要以分子状态或无定型状态分散于载体介质中。用超速离心法对 ON—PLA-NP冻干品的体外释药特性进行了研究，结果表明ON．PLA-NP的体外释药 具有缓释制剂特征，符合Hi．fi方程：Q=8．944t1～11．246，，=O．9883。初步稳定性 考察结果表明ON．PLA-NP冻干品可在3．5℃，20．25℃条件下保存3个月。 本文采用HPLC法，分别测定了小鼠尾静脉注射ON．Sol和ON．PLA-NP后 在体内的组织分布情况，结果表明聚乳酸纳米粒能够使ON靶向性选择分布在吞 噬细胞丰富的肝、脾、肺中，并明显延长ON在这些组织中的作用时间，从而有 利于提高ON的治疗效果，具有重要临床意义。 血药浓度数据分析结果表明，ON制成ON．PLA_NP后，可避免给药后血药 浓度的峰谷现象，使血药浓度能够一直维持较为平稳的水平。采用3P97药物动 力学处理程序对测定结果进行模型拟合，结果表明，以三室模型描述药物在体内 的动态过程最合适，ON．Sol和ON．PLA-NP的药物动力学方程分别为： C==231．58e玉74I+13．62e-1．10c+2．62e．01It和C=59．06e7．83％12．28e∞25t+1．43em·oa。ON．So