氯化锂联合自体激活雪旺细胞治疗脊髓损伤的研究-外科学(骨科学)专业毕业论文.docxVIP

天津医科大学硕士研究生学位论文中文摘要 天津医科大学硕士研究生学位论文 中文摘要 【目的】 将Wistar成鼠自体激活雪旺细胞进行体外培养，并联合氯化 锂对急性脊髓损伤动物模型进行治疗，对脊髓损伤恢复情况进行行为学、神经 电生理学和组织学评价，探讨氯化锂联合移植自体激活雪旺细胞在治疗脊髓损 伤中的作用，评价该方法的疗效。 【方法】 通过结扎双侧隐神经激活自体雪旺细胞并进行体外分离、培养、 纯化，测定不同培养时期培养基中NGF、BDNF含量变化。Wistar大鼠48只以改 良Allens’法建立Tlo急性脊髓损伤模型。随机分为4组，每组12只：单纯DMEM 移植空白对照组、氯化锂腹腔注射组、自体激活雪旺细胞(autologus activated schwann cells，AASCs)移植组和氯化锂联合AASCs组。术后每周每组随机选取 5只大鼠采用NICOLET Viking IVB型肌电图仪进行体感诱发电位(soⅢat。sensory evoked potential，SEP)和运动诱发电位(Motion evoked potential，MEP) 检查，与正常鼠比较。术后每周每组随机选取8只对实验动物进行功能评价(BBB 行为功能评分)。12周后每组随机选择2只动物进行10％BDA神经顺行示踪标记， 标记2周后(术后14周)处死动物。取出动物损伤段脊髓作5 u m快速冰冻切片 后，进行Cy3荧光染色、荧光免疫组化及HE染色，切片染色用显微图像分析软 件Image pro plus分析处理。比较各组的统计学差异。 【结果】 自体激活雪旺细胞经分离纯化后在体外稳定传4代，生长状态良 好。术后4周BBB行为功能评分实验组较对照组功能恢复明显，各组之间差异有 统计学意义(ANOVA检验，PO．05)。术后起体感诱发电位检查，联合移植组和 自体激活雪旺细胞移植组以及单纯氯化锂组组间差异有统计学意义(p0．05)； BDA顺行示踪，HE染色、荧光免疫组化染色显示联合移植组和雪旺细胞移植组较 单纯氯化锂组有较多的神经纤维穿过缺损部位，而空白对照组几乎未见再生神经 纤维穿越，各组间差异有统计学意义(p0．05)。 【结论】自体激活雪旺细胞可分泌大量神经营养因子，并能明显促进急性脊 髓损伤后的轴突再生和肢体功能恢复；氯化锂具有神经保护功能，在脊髓损伤后 天津医科大学硕士研究生学位论文 天津医科大学硕士研究生学位论文 应用氯化锂连续1周腹腔注射可以改善功能恢复。氯化锂联合自体激活雪旺细胞 治疗脊髓损伤能促进轴突再生，显著改善脊髓损伤后的功能恢复。 【关键词】 雪旺细胞；氯化锂；脊髓损伤；再生 一一 一一 查堡堕型查兰堡主堕壅生堂垡笙苎 Abstract 【Objective】To observe the effect of transplanting autol。gus activated Sehwann cells(AASCs)to the spinal cord injury site and injecting lithium chloride in Wistar rats． [Methods 1 Saphenous nerves are ligated directly，1 week fater， we select the tissue clot method to culture the Schwann cel ls respectivelv 48 moderate degree spinal cord injured rats were classified into 4 subgroups，12 in each group．group A：media was injected into the cord injury site，group B：AASCs were transplanted into the cord injury site， group C：intraperitoneal injection of lithium chloride every day lasting 1 week，group D：AASCs were transplanted into the cord injury site，at mean time the intraperitoneal injection of lithium chloride every day lasting 1 week．We checked the BBB scores to evaluate the functional recoverv in each group at 1、2、4、8 weeks after transplantation．