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细菌的接种技术实验报告 　　试验一细菌分离培养　　试验目的：1、掌握培养基的原理、分类及配置方法。　　2、熟悉无菌操作技术、细菌标本的分离、纯化接种方法　　3、熟悉细菌培养所用的基本仪器及使用方法。　　试验仪器：生物安全柜、电热恒温培养箱、电冰箱、低温冰箱、蒸汽高压消毒器、　　超净工作台、电子天平、普通光学显微镜、鼓风干燥箱，电磁炉，微　　波炉等　　试验材料：　　1、菌种：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌。　　2、培养基：普通琼脂培养基。　　试验步骤：　　1、绪论录象　　2、宣读微生物实验室规则　　3、细菌接种：　　①平板倾注，每人倾注一个平板；　　②平板划线，四区划线，分离单个菌落。　　③细菌斜面接种。　　4、结果报告　　5、讨论　　讲述：　　一、细菌的人工培养　　微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到许多外界因素的影响，　　如营养物浓度、温度、水分、气体环境、pH等。微生物的种类不同，培养的方　　式和所需要的条件也不尽相同。　　影响微生物生长的因素　　微生物的生长，除了受本身的遗传特性决定外，还受到外界许多因素的影响。　　影响微生物生长的因素很多，简要介绍如下。　　1)营养物质　　细菌所需要的营养浓度非常之低，所以在自然界中，它们到处生长，可谓是　　无孔不入。然而营养太低时，细菌生长就会遇到困难，甚至还会死亡。故有的营　　养要求相对较高的细菌，培养时需加相应的营养物质，以维持其生长需要。　　２）温度　　在一定的温度范围内，每种微生物都有自已的生长温度三基点：最低生　　长温度、最适生长温度和最高生长温度。在生长温度三基点内，微生物都能生长，　　但生长速率不一样。微生物只有处于最适生长温度时，生长速度才最快，待时最　　短。超过最低生长温度，微生物不会生长，温度太低，甚至会死亡。超过最高生　　长温度，微生物也要停止生长，温度过高。也会死亡。一般情况下，每种微生物　　的生长温度三基点是恒定的。但也常受其它环境条件的影响而发生变化。　　根据微生物最适生长温度的不同，可将它们分为三个类型：　　a.嗜冷微生物：其是适生长温度多数在-10℃－20℃之间　　b.中温微生物：其最适生长温度一般在20℃－45℃之间　　c.嗜热微生物：生长温度在45℃以上。　　３）湿度　　水分是微生物进行生长的必要条件。芽孢、孢子萌发，首先需要水分。　　微生物是不能脱离水而生存的。但是微生物只能在水溶液中生长，而不能生活在　　纯水中。各种微生物在不能生长发育的水分活性范围内，均具有狭小的适当的水　　分活性区域。　　４）气体　　A氧气按照微生物对氧气的需要情况，可将它们分为以下五个类型。　　a.需氧微生物　　这类微生物需要氧气供呼吸之用。没有氧气，便不能生长，但是高浓度　　的氧气对需氧微生物也是有毒的。很多需氧微生物不能在氧气浓度大于大气中氧　　气浓度的条件下生长。绝大多数微生物都属于这个类型。　　b.兼性需氧微生物　　这类微生物在有氧气存在或无氧气存在情况下，都能生长，只不过所进　　行的代谢途径不同罢了。在无氧气存在的条件下，它进行发酵作用，例如酵母菌　　的无氧乙醇发酵。　　c.微量需氧微生物　　这类菌是需要氧气的，但只在大气压下生长最好。这可能是由一它　　们含有在强氧化条件下失活的酶，因而只有在低压下作用。　　d.耐氧微生物　　这类微生物在生长过程中，不需要氧气，但也不怕氧气存在，不会被氧　　气所杀死。　　c.厌氧微生物　　这类微生物在生长过程中，不需要分子氧。分子氧存在对它们生长产生　　毒害，不是被抑制，就是被杀死。　　B其他气体：有的细菌生长需要氮气、二氧化碳等气体　　物理因素：如射线----日光、紫外线、声波；　　5）其他因素：化学因素：Ph、消毒剂、防腐剂等　　生物因素：抗生素、细菌素、噬菌体等　　培养基　　营养成分：水、氮源、碳源、无机盐、生长因子　　1、培养基的主要成分凝固物质：琼脂、明胶、卵蛋白及血清等　　抑制剂：加入某些化学物质，　　抑制某些非目的菌生长，有利于目的菌的生长　　培养基、厌氧培养基　　2按固型成分：固体培养基平板、斜面　　半固体培养基　　液体培养基按工艺：天然培养基、人工培养基　　3、培养基的制作过程：配料---溶解---调pH---过滤---分装---高压灭菌---　　备用　　、培养方法　　根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养两大类。　　1、需氧培养：也称“好气培养”。就是说这种微生物在培养时，需要有氧气加入，否则就不能生长良好。在实验室中，斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡，使外界的空气源源不断地进入瓶