细胞器叶绿体的提取实验报告.docxVIP

细胞器叶绿体的提取实验报告 　　叶绿体提取和荧光观察　　【摘要】叶绿体足植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的。由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。　　【关键字】叶绿体提取荧光观察　　【背景介绍】叶肉细胞中的叶绿体内含叶绿素，使植物呈现绿色。叶绿体是细胞内扁平的椭球形或球形的三个双层膜细胞器之一，叶绿体内基粒是光合作用的场所。高等植物的叶绿体呈椭球状，在不同的光照条件下，叶绿体可以运动，改变椭球体的方向，这样既能接受较多的光照，又不至于被强光灼伤。在弱光下，叶绿体以其椭球体的正面朝向光源；在强光下，叶绿体以其椭球体的侧面朝向光源。因此，在不同光照条件下采集的葫芦藓,观察到其小叶内叶绿体的形状不完全一样。　　将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。通过控制离心力和离心时间等因素，不同的细胞器可以通过阶梯离心的方式得到分离。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速度不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部．分批收集即可获得各种亚细胞组分。　　叶绿体的分离应在等渗溶液(/L氯化钠或/L蔗糖溶液)中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。将匀浆液在1000r/min的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。然后，在3000r/min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。分离过程最好在0—5℃的条件下进行：如果在室温下，要迅速分离和观察。　　荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观察的一种技术。某些物质在—定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光．若停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和水质素的黄色荧光等。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。　　叶绿素吸收的光能主要用于光合作用。多余的能量可能以热的形式散发，也可能以激发光的形式散发。这种激发光就称为叶绿素荧光。叶绿素荧光检测技术作为一种强大的工具，广泛应用于生态学和植物生理学研究。　　利用荧光显微镜对可发荧光物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载玻片，　　益玻片和无荧光油。　　【实验材料】　　试剂：氯化钠等渗溶液、新鲜菠菜；　　仪器：天平、匀浆机、离心机、烧杯、纱布、普通光学显微镜、荧光显微镜等；　　【实验方法】　　1.取干净的菠菜叶子的下表皮的薄薄的一层几乎透明的一层做成　　装片进行观察，在普通显微镜以及荧光显微镜下分别观察气孔、保卫细胞等并照相；　　2.称取一份30克新鲜菠菜叶子，去除叶梗、叶脉。水洗干净后用　　纱布擦干；　　3.放入匀浆机中，加150ml氯化钠等渗溶液，高速搅拌3分钟。　　4.将匀浆液用6层纱布过滤到烧杯中。　　5.取4ml过滤液于离心管中进行离心，1000r/min，2min.　　6.将上清液取出于另一只离心管中进行离心，3000r/min，5min.　　7.保留两次离心的上清和沉淀。将最后一次的沉淀重悬浮于2ml氯化钠等渗溶液。　　8．用最后的沉淀的悬液制作滴片，先在光镜，然后是荧光镜下观察。最好抓住时间和时机进行拍照。　　9.实验结束收拾好实验台；　　【注意事项】　　1．在选择菠菜叶子时，选择新鲜嫩绿的叶子进行实验；　　2．搅拌时最好保证完全搅拌，保证细胞器的分离率；　　3．显微观察以及荧光显微观察时注意调节，同时要有耐心，不可　　过于急躁；　　4．照相时抓住时机，仔细观察；　　【实验结果】　　1）在普通和荧光显微镜下观察叶子的下表面的表皮：　　在普通显微镜下观察的气孔及保卫细胞　　以下是在荧光显微镜的的图片　　用最后的沉淀制的悬液在普通显微镜以及荧光显微镜下:以下是悬液在普通显微镜下观察到的叶绿体：　　以下是在荧光显微镜下观察到的叶绿体的红色荧光：　　实验四植物叶绿体的提取与观察　　组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，