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;、多克隆抗体（ , ）： 用一种包含多种抗原决定簇的抗原免疫动物，可刺激机体多个细胞克隆产生针对多种抗原表位的不同抗体。所获得的免疫血清实际上是含有多种抗体的混合物。、单克隆抗体（ , ）： 由一个识别一种抗原表位的细胞克隆产生的同源抗体。高度均一、特异性强、效价高、少或无交叉反应性。 与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应。; ;杂交瘤技术的诞生 年月日，和在英国《自然》杂志上发表了题为“分泌具有预定特异性抗体的融合细胞的持续培养”（ ） 年度荣获诺贝尔生理学和医学奖; 一、 杂交瘤技术的基本原理;抗体种类： 第一代抗体 多克隆抗体 （ ) 第二代抗体 单克隆抗体 （ ) 第三代抗体 基因工程抗体 （ );淋巴细胞:寿命短,分泌特异系性抗体 骨髓瘤细胞：寿命长 杂交瘤细胞：寿命长，单 隆抗体;流 程; 不产生的重链和轻链 与提供淋巴细胞的动物品系相同; 动 物： 小鼠 ～周龄 ～体重;细胞性抗原： （）×只，不加佐剂，周重复一次 可溶性抗原： 首次，完全福氏佐剂微克抗原，周微克抗原，融合前天，加强免疫 体内免疫法免疫原性强、来源充分的抗原，对于免疫原性很弱或对机体有害（如引起免疫抑制）的抗原就不适用了;。;。;。;免疫原特性;培养液： 培养液 培养液;细胞融合剂： :分子量 的是最常用的细胞融合剂 作用机理：诱导细胞膜上脂类物质结构重排，使细胞膜易打开而有助于细胞融合 作用特点：随机发生的，不同厂商、批号、分子量的，其纯度与毒性有所不同 最早仙台病毒被用做融合剂，后来发现聚乙二醇（）的融合效果更好，且避免了病毒的污染问题;培养骨髓瘤细胞： 选择对数生长期的细胞进行传代培养 细胞形态：浑圆、透亮、均一、排列整齐 避免细胞返祖：定期用处理细胞 注意事项：切忌过多传代培养，可将细胞分装冻存于℃或液氮及干冰中;免疫脾细胞的制备： ×的淋巴细胞 无菌手术;常用的饲养细胞有胸腺细胞、正常脾细胞和腹腔巨噬细胞 其中还有清除死亡细胞的作用 饲养存活一般不超过周，不影响杂交瘤细胞的纯化;。;融合方法;～天出现克隆 筛选杂交瘤细胞在融合后周左右即可筛选，即把分泌所需抗体的杂交瘤孔从众多的孔中选出来，通常也称为抗体检测。;常用的抗体检测方法：;酶与酶： 次黄嘌呤磷酸核糖转化酶 胸腺嘧啶核苷激酶;培养基： （）:次黄嘌呤 （）：氨基喋呤；叶酸拮抗物，阻断合成主要途径 ()：胸腺嘧啶核苷；“核苷酸前体”，供细胞通过替代途径合成;选择作用： 淋巴细胞：不能生长，天死亡；合成的主要途径被阻断 骨髓瘤细胞：不能生长，天死亡；缺乏，合成的替代途径受阻;: ，;　长命 脾细胞: ， ;短命(天) 杂交瘤细胞 ，; 长命;杂交瘤细胞： 长期生长繁殖 利用淋巴细胞的，将合成为嘌呤碱并最终与一起合成 从淋巴细胞获得产生某种抗体的遗传信息 从骨髓瘤细胞获得不断繁殖的能力;有限稀释法( ) 法（ ） 软琼脂平板法( );有限稀释法; 效率最高 价格昂贵;软琼脂平板法( );配制方案：杂交瘤细胞（（～）) 细胞冻存液(～ 牛血清，～ 培养液， ) “慢冻”：分步冷冻，℃→℃→液氮?保存数年至数十年 “快融”：取出立即浸入℃～℃水浴中，使其迅速融化、复苏;防止污染 避免染色体丢失 防止非分泌细胞的过度生长 防止细胞密度过高而死亡;（三）单克隆抗体的性质鉴定;（）单抗理化特性的鉴定 抗体亲合力是指抗体与抗原或半抗原结合的程度，其高低主要是由抗体和抗原分子的大小、抗体分子结合簇（部）和抗原决定簇之间的立体构型的合适程度决定的。亲合力通常以平均内在结合常数（）表示。 常用的方法有竞争、非竞争性 、间接、间接法夹心等 （）单抗与相应抗原的反应性测定 包括各类免疫血清学试验、生物学试验和免疫化学技术等; 三、单克隆抗体的制备;（一）单克隆抗体的产生;腹腔注射法; 体外培养法： 、悬浮培养法：小规模悬浮培养多采用转瓶培养，通过搅拌使细胞呈悬浮状态；而大规模悬浮培养多采用发酵式的生物反应器 、微载体培养法：主要以交联琼脂糖或葡聚糖、聚苯乙烯、玻璃等作为基质的产品 、中空纤维细胞培养系统：由中空纤维生物反应器、培养基容器、供氧器和蠕动泵等组成 、微囊化细胞培养系统：先将杂交瘤细胞微囊化，然后将此具有半透膜的微囊置于培养液中进行悬浮培养，一定时间后，从培养液中分离出微囊，冲洗后打开囊膜，离心后即可获得高浓度的单抗。;（）杂交瘤细胞的无血清培养 已报道的各类无血清培养基有含有大豆类脂的、含有酪蛋白的、化