第四章 酶工程.pptVIP

第四章 酶工程 参考书籍 彭志英主编. 《食品生物技术导论》. 中国轻工业出版社，2010 罗云波，生吉萍主编.《食品生物技术导论》.化学工业出版社，2006 施巧琴主编.《酶工程》.科学出版社, 2005 郭勇编.《酶工程原理与技术》.高等教育出版社, 2005 第一节 酶工程原理与技术 利用酶具有的特异催化功能，对酶结构进行修饰改造，并借助于生物反应器和工艺优化过程，有效地发挥酶的催化特性来生产人类所需产品的技术。它包括酶的提取与分离纯化技术、酶固定化技术、酶非水相催化技术、酶的蛋白质工程和酶反应器设计等。 化学酶工程 也称初级酶工程，指自然酶、化学修饰酶、固定化酶以及人工合成酶的研究和应用。 （1）自然酶：由生物材料中分离出来的酶制成的酶制剂。价格低，生产方式简单；应用方便，不需辅因子参加；产品种类少，应用范围窄。 （2）化学修饰酶：通过酶分子的化学修饰达到改性变构的目的。主要用于酶学研究和疾病治疗。 （3）固定化酶：酶分子通过吸附、交联、包埋及共价结合等方法束缚于某种特定支持物上发挥酶的作用。它在食品工业上具有较大的应用价值。 （4）人工合成酶：化学合成具有与天然酶相似功能的催化物质，可以是蛋白质，也可以是简单的大分子物质。 生物酶工程 也称高级酶工程，是酶学和分子生物学技术结合的产物。 （1）利用基因工程技术大量生产的酶（克隆酶）。 （2）修饰酶基因产生的遗传修饰酶（突变酶）。 （3）设计新酶基因，合成自然界不曾有的酶。 非水介质中的酶反应 主要研究非水相中酶的酶学性质、影响因素和催化机制等酶学基础问题，探索生物大分子与环境间相互影响规律，加深对各种生命活动现象的理解和认识。 酶反应器 酶反应器是完成酶促反应的装置，研究内容包括酶反应器的类型、特性；酶反应器的设计、制造及选择等。 二、酶的生产与分离纯化技术 酶的生产 （1）经过预先设计，并且通过人工控制而获得所需酶的过程； （2）酶的生产方法有提取法、发酵法和化学合成法，常用的是微生物发酵法。 酶的提取 在一定条件下，用适当溶剂处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂中的过程。常用方法：盐溶液提取、酸碱溶液提取、有机溶剂提取。 酶的精制 即高度纯化。常用方法：沉淀法、离心法、超滤法、色谱分离法等。 通过改变某些条件，使溶液中某种物质的溶解度降低，从溶液中沉淀析出，达到与其他物质分离的目的。 盐析沉淀法 （1）常用盐：硫酸铵、硫酸钠、氯化钠和磷酸钠等，其中以硫酸铵最为常用； （2）盐析沉淀所得到的产品常含有大量盐分，可用超滤或层析等方法脱盐，使酶进一步纯化。 等电点沉淀法 利用蛋白质在等电点时溶解度最低，以及不同的蛋白质具有不同的等电点这一特性，对酶进行分离纯化的方法。经常与盐析沉淀、有机溶剂沉淀等方法一起使用，使其沉淀完全。 有机溶剂沉淀法 利用酶在有机溶剂中溶解度不同而使其分离。常用有机溶剂：乙醇、丙酮、异丙酮等。 离心分离法 在酶的提取分离纯化过程中，细胞收集、细胞碎片和沉淀的分离以及酶纯化等要使用离心分离。 体积排阻法 利用溶液中各组分相对分子质量不同来进行分离的一种方法。常用凝胶：葡聚糖凝胶（Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）和聚丙烯酰胺凝胶（Biogel）等。 超滤 （1）在一定的正压力或负压力驱动下，将料液强制通过一定孔径的超滤膜，部分小分子溶质和溶剂透过膜而成为超滤液，大分子酶和蛋白质等物质被截留，从而达到分离纯化目的，也可用于酶液的浓缩和脱色； （2）超滤膜截留颗粒直径范围为2～200nm，相当于相对分子质量1,000～500,000； （3）构成超滤膜的主要材料有醋酸纤维、尼龙、聚砜、陶瓷等。 SDS（1）带电粒子在电场中向着与其自身所带电荷相反的电极移动的过程； （2）在外电场作用下，电泳迁移率主要依赖于酶的相对分子质量，与所带的净电荷和形状无关； （3）为了减少对流扩散，电泳过程一般在浸透了缓冲液的聚丙烯酰胺凝胶上进行； （4）电泳分离的蛋白质的量通常较小（约数毫克），常用作分析用。 离子交换层析 （1）根据被分离物质与分离介质（离子交换剂）间异种电荷静电引力的不同来进行物质分离。不同离子交换剂上可解离基团对各种离子的亲和力不同，而使不同物质分离； （2）离子交换剂根据活性基团的性质分为阳离子交换剂和阴离子交换剂。酶具有两性性质，可用阳离子交换剂，也可用阴离子交换剂进行酶的分离纯化。 等电聚焦电泳 （1）先从阳极顶端扩散装入一种酸（如磷酸），然后从阴极端扩