第十七章 液相色谱法2.pptVIP

第三节 高效液相色谱法类型 一、液固吸附色谱 二、液液分配色谱 三、化学键合相色谱 四、离子交换色谱 五、尺寸排阻色谱 六、亲和色谱 一、液-固吸附色谱  liquid-solid adsorption chromatography 原理：组分在固定相上的吸附能力不同 固定相：固体吸附剂多为5～10μm全多孔型硅胶、氧化铝微粒 流动相： 调节溶剂极性，可以控制组分的保留时间 溶剂强度参数ε°（单位面积吸附剂表面的溶剂吸附能） 选择基本原则 极性大的试样用极性较强的流动相， 极性小的试样用极性较弱的流动相 适用：相对分子量中等的油溶性和几何异构体分离 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾 二、 液-液分配色谱  liquid-liquid partition chromatography 原理：利用组分在两相中溶解度的差异（分配） 流动相：流动相的极性小于固定液的极性——正相 normal phase 如烃类。 流动相的极性大于固定液的极性——反相 reverse phase 如水、甲醇、乙腈 固定相：载体+固定液（物理或机械涂渍法） 缺点：固定液易流失，不能梯度洗脱 三、化学键合相色谱chemical bonded phase chromatography 利用化学反应将固定液的官能团键合在载体表面 1．分离机制：分配 + 吸附（以LLC为基础） 2．特点： 1）不易流失 2）热稳定性好 3）化学性能好 4）载样量大 5）适于梯度洗脱 键合固定相类型 用于制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶。 硅胶表面的硅醇基(Si一OH)与有机分子成键,得到各种性能的固定相。 （1）疏水基团 不同链长的烷烃（C8和C18）和苯基等 （2）极性基团 如氨基，氰基、醚和醇等 （3）离子交换基团 如作为阴离子交换基团的胺基、季胺盐；作为阳离子交换基团的磺酸基等 键合固定相的制备 （l）硅酸酯（≡Si一OR）键合固定相 醇与硅醇基发生酯化反应： ≡Si－0H＋ROH→≡Si－OR＋H20 表面是一些单体，传质特性良好, 酯化过的硅胶填料易水解且受热不稳定， 适用于不含水或醇的流动相。 不易水解，热稳定较硅酸酯好。 格氏反应不方便； pH限制在4～8范围。 （2）≡Si－C或Si一N共价键合固定相 （3）硅烷化（≡Si—O－Si－C）键合固定相 热稳定性好，不易吸水，耐有机溶剂。 70℃以下，pH=2～8范围， 应用较广泛。 （二）正相键合相色谱 分离机制：溶质分子与固定相之间定向力、诱导力、 氢键作用力 固定相：极性大的氰基或氨基键合相 流动相：极性小 底剂 + 有机极性调节剂（正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇） 适用：分离异构体、极性不同的化合物，特别适用于分离不同类型的化合物。 （三）反相键合相色谱 分离机制：疏溶剂理论 固定相：极性小的烷基键合相 C8，C18（ODS柱） 流动相：甲醇-水、乙腈-水 流动相极性 固定相极性 适用：非极性~中等极性组分（HPLC80%问题） 离子对色谱（ ion pair chromatography ）分离离子、可电离的分子。适用于pka3的酸或pkb8的碱。 原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子 （对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结 合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进 行分配（酸－季铵盐、碱－磺酸盐）； 反相离子对色谱：非极性的疏水固定相(C-18)，含 有对离子Y+的甲醇-水或乙腈-水作为流动相，试样离 子X-进入流动相后，生成疏水性离子对Y+X-后；在两 相间分配。 扩大反相键合色谱应用于强酸、强碱的分析 三、 离子交换色谱ion-exchange chromatography 原理：组分在固定相上发生的离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R-Y＋+M+ = R-M+ +Y + 阴离子交换：R＋Y-+M- = R＋M - +Y-