美国红梣抗菌肽的分离纯化及理化性质研究-植物学专业毕业论文.docxVIP

山东师范大学硕士论文美国红丰岑抗菌肽的分离纯化及理化性质研究 山东师范大学硕士论文 美国红丰岑抗菌肽的分离纯化及理化性质研究 中文摘要 抗菌肽广泛存在于植物、动物和微生物体内，人们最早于1972年从惜古比天蚕 中分离得到。根据抗菌肽的来源不同，可以分成四类：1．来源于昆虫的抗菌肽。这 类抗菌肽主要包括天蚕素，昆虫防御素，富含脯氨酸或精氨酸的抗菌肽，富含甘氨 酸的抗菌肽，抗真菌肽等；2．来源于脊椎动物的抗菌肽。这类抗菌肽主要包括 Magainins，防御素，Cathelicidins等；3．来源于微生物的抗菌肽。这类抗菌肽包括乳 链菌肽，酵母杀菌素，哌珀霉素等；4．来源于植物的抗菌肽。这类抗菌肽主要由寡 肽、环肽及大环寡肽组成。随着分离鉴定技术的发展和多肽蛋白质研究的深入，人 们已经从植物中分离到了一百多种活性多肽。尽管人们在动物体内发现了许多重要 的活性多肽，但对植物中存在的天然活性肽的研究却很少。抗菌肽的作用机理目前 观点尚不统一，较为经典的的有如下几种模式：桶状孔道模式(Barrel--Stavemodel)、 毯式模式(CarpetmodeD和虫蚀样孔道模式(toroidal(wormhole)pore model)． 本文利用水提法对50种植物种子(果实)进行了初步筛选。结果发现山茱荑、苤 蓝、八角茴香对4种革兰氏阳性菌均有较强的抑制作用，对革兰氏阴性菌的抑制能方 不大。山茱萸、苤蓝两者对细菌的抑制能力相差不大，但均强于八角茴香。苦楝仅 对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌有一定的抑制作用。而自芥对除枯草芽孢杆菌外 的所有供试菌株均无作用。所有供试植物种子(果实)中狭叶珍珠菜对除酿酒酵母之 外的所有供试真菌均有抑制作用，八角茴香仅对小麦根腐病菌有抑制作用，其余种 子(果实)提取液对供试真菌均无作用 本文通过凝胶过滤层析和反相高效液相色谱相结合的方法对美国红栲果实水浸 提液中的抗菌肽进行了分离纯化，得到了分子量小于Sephadex G-15凝胶排阻分子量 l 500Da的小分子抗菌肽。通过LC／ESI-MS液质联用法对该物质进行了初步分析，根 据其正离子采集模式下的谱图推测该物质的分子量约为765．3Da，其氨基酸组成可能 为N--甲基精氨酸，焦谷氨酸，苯丙氨酸，脯氨酸，胱氨酸。确切的分子量及氨基酸 序列有待于进行进一步的实验研究． 山东师范大学硕士论文同时，利用琼脂扩散的原理，通过管碟法和打孔法分别测定了抗菌肽对细菌及真菌 山东师范大学硕士论文 同时，利用琼脂扩散的原理，通过管碟法和打孔法分别测定了抗菌肽对细菌及真菌 的抑菌谱，发现该抗菌肽可以广泛抑制革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌，但对真 菌的抑制作用较小，只观察到了对小麦根腐病菌的抑制作用。管碟法对物质的抑菌 性质的实验表明，该抗菌肽具有很好的热稳定性，可以在长时间的高温处理下仍然 保持抑菌活性。同时该抗菌肽还可以忍受极端的口H处理及高强度的离子浓度。并且 该抗菌肽对某些有机溶剂及表砸活性剂也有较强的稳定性。 关键词：植物种子抗菌肽美国红樗分离纯化 分类号：Q949．776．2 2 山东师范大学硕士论文Purification 山东师范大学硕士论文 Purification and characterization ofan antimicrobial peptide from Fraxinus pennsylvanica fruits Abstract Antimicrobial peptides are produced by a multitude of organisms including plants， bacteria,insects and mammals．Antimicrobial pepfide was found in 1972 from Hyatophom eecropia They ofIcIl have a basic pl and ale highly resistant协gtreme temperature treatment．They o,an be divided into four groups according to their origin：1． the AMPs originate from the insecL These AMPs include Ceeropins，Insect defemins， Prolinerich peptides，Glyeine-rich peptides，Anti·fun#peptide：2．the AMes originate from the Vertebrate。These Ams include Magairtins．Defensim,Cathelicidins；；3．the A／