棉花枯萎病菌异核体的研究-微生物学专业毕业论文.docxVIP

摘 摘 要 本研究以探讨丝状真菌异核机制为目的，以分离自河南的棉花枯萎病菌异 核体菌株及其两个表型差异明显的同核型分离子为材料，在确定它们的致病性 明显不同的基础上，选用银染mRNA差异显示技术，从基因转录水平上寻找菌 株间差异表达的cDNA片段，并针对真菌分类及遗传学研究中关注的rDNA的 可变区域(ITS区)和基因组可转移因子Foxy进行检测。 f实验证明，供试菌株在rDNA的可变区域ITSI和ITS2的碱基序列完全相 同：每个菌株均发现Foxy序列(480bp)的存在，且序列符合短散布重复序列 的特征。 采用银染mRNA差异显示技术，从供试菌株中共获得300～700bp之间的 19条差异片段。经反向RNA印记证实，其中2条差异片段G5和C6杂交信号 明显。G5片段(432bp)在A9149和A9149-III菌株中呈高表达，此片段推算 出的氨基酸序列与粗糙脉孢菌(Neumsporacrassa)中一个与OtrB(tetracycline efflux protein)相关的蛋白的氨基酸序列有64％的同源性，与龟裂链霉菌 (Streptomyces rimosus)中的OtrB蛋白的氨基酸序列有35％的同源性。C6片 段(564bp)在A9149和A9149-I中呈高表达，此片段推算出的氨基酸序列与多 种生物的NADH脱氢酶第六个亚单位的氨基酸序列有不同程度的同源性。)” Southern杂交证实，它们均定位于核基因组上。由此提供了异核体及其同核分 离子之间出现表型差异的分子证据。 本文结合以往的研究结果推测，由于可转移因子的随机跳跃与插入，导致 菌株某些基因的关闭或开放，可能是菌株出现表型差异的原因之一。 关键词{棉花枯萝病菌，异糁体，同核芎爹离子’ITS区，m巴沙差异尹示’V 、／ 、／ ＼／ V ，oxv 蠹女麴隧激幻璃≮，遴，$蕊。群，。j灞a酗教，、 AbstractIn Abstract In order to elucidate the mechanism of heterokaryon，our research focus on the heterokaryon(A9149)isolated from a wild type strain of Fusarium oxysporum f．sp． vasinfectum and its segregants(Agl49-I，A9149-lid，which have remarkable difference on their phenotypes．On going to find the different expressed genes，we used mRNA differential display method，sequenced the ITS region(ITSl and ITS2) and tested existing ofthe mmsposable element(Foxy)in all the three strains． The results showed that the ITS Sequences are completely identical and the Foxy(480bp)exists in all the three strains． Using silver staining mRNA differential display,19 different expressed eDNA fragments whose length between 300hp to 700bp were obtained，of which two eDNA fragments(05 and c6)were observed to be positive after Rev-Northem blot． The G5 eDNA fragment is higllly expressed in the A9149 and the A9149-III，and its amino acid sequence predicted is 64％identical to the protein related to the OtrB (tetracycline efflux protein)of Neurospora crassa and 35％to the OtrB of Streptomyces rimosus．While the C6 eDNA fragment is highly expressed in the A9149 and the A9149-I，its amino acid sequence shared homologies